1.一种产羟基化甾体原料药的重组大肠杆菌,其特征在于,所述的重组大肠杆菌通过如下方法构建获得:利用DNA重组技术将scyE基因克隆至pT7NS‑camAB载体中,获得重组载体pET11::scyE::camA‑camB,将其导入到大肠杆菌BL21(DE3)中,最终获得共表达重组大肠杆菌;所述scyE基因序列如SEQ ID NO.1所示,载体pT7NS‑camAB的基因序列如SEQ ID NO.2所示,重组载体pET11::scyE::camA‑camB的基因序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种权利要求1所述的产羟基化甾体原料药的重组大肠杆菌的应用,其特征在于,具体为:(1)在OD600值为0.6‑0.8的重组大肠杆菌菌液中加入5‑氨基乙酰丙酸盐和异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷同时将温度降至20℃,继续培养22h;其中,5‑氨基乙酰丙酸盐的浓度为
0.5mM,异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷的浓度为0.2mM;
(2)将步骤1培养得到的菌液在4℃,8000rpm条件下离心10min,收集沉淀的菌体,并用预冷的磷酸盐缓冲液对菌体进行洗涤,磷酸盐缓冲液的pH为7.2;收集洗涤后的菌体,将其悬浮于磷酸盐缓冲液中得到菌体磷酸缓冲液;
(3)利用所述菌体磷酸盐缓冲液进行生物转化实现16α羟基化:将甾体原料药加入菌体磷酸盐缓冲液中在25℃下振荡反应24h;待反应结束后,加入等体积乙酸乙酯停止反应,对反应液中的产物进行提取、分离,得到16α羟基化甾体药物;其中,所述甾体原料药为孕酮、雄烯二酮或睾酮。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述步骤2中,悬浮的磷酸盐缓冲液与离心前的菌液的体积比为1:5;所述甾体原料药溶解在质量浓度为36%的助溶剂羟丙基‑β‑环糊精中,加入菌体磷酸盐缓冲液后的终浓度为0.1~1.5g/L。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,pH为7.2的磷酸盐缓冲液由终浓度为50mM的磷酸盐和甘油组成,甘油体积为所述磷酸盐缓冲液的10%。