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专利号: 202010455589X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法,其特征在于,通过同源重组的方法将包含1-4个SD序列的基因片段整合至编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG序列的距离为0-20bp。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述大肠杆菌是E.coli  BL21、E.coliJM109、E.coli DH5α、E.coli Rosetta、E.coli TOP10、E.coliM110或E.coliS110。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)设计并合成含有抗性基因及待整合基因上下游同源臂的整合框;所述待整合基因包括编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子,所述上下游同源臂中包括1-4个SD序列;

(2)将所述整合框电转化至含有质粒载体的大肠杆菌电转化感受态细胞,同源重组后筛选出基因整合的大肠杆菌,并消除抗性基因。

6.一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌中,编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子和DacA编码基因之间整合有1-4个SD序列。

7.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌,其特征在于,编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

8.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌,其特征在于,距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG的距离为0-20bp。

9.权利要求6所述的重组大肠杆菌在重组蛋白胞外生产中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述重组蛋白包括淀粉酶、绿色荧光蛋、胶原蛋白、果糖基转移酶、甲基对硫磷水解酶、过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶中的一种或几种。