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专利号: 2020114904613
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种生产四氢嘧啶的方法,其特征在于,利用重组大肠杆菌,全细胞转化葡萄糖生成四氢嘧啶;所述重组大肠杆菌是以大肠杆菌MG1655为出发菌株,并敲除了编码磷酸转移酶系统葡萄糖特异酶II结构域A的crr基因,敲除编码乙醛酸分支转录抑制子的iclR基因,敲除编码双功能天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶的thrA基因,并过表达基因簇ectABC、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC、天冬氨酸脱氢酶PaeAspDH和编码天冬氨酸激酶III的抗反馈抑制的基因EclysC;

所述crr基因的Gene ID为946880,所述iclR基因的Gene ID为948524,所述thrA基因的Gene ID为945803;

所述基因簇ectABC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC的核苷酸序列如NCBI登录号为AP023230的第

1916877~1919528位所示;所述基因EclysC的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;编码所述天冬氨酸脱氢酶PaeAspDH的核苷酸序列如NCBI登录号为CP034908的第3906908~3907711位所示;

所述基因簇ectABC,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC,天冬氨酸脱氢酶PaeAspDH和编码天冬氨酸激酶III的抗反馈抑制的基因EclysC利用载体pFT28表达:利用核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PR启动子表达基因簇ectABC,利用核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的启动子PJ23115表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC,利用启动子PR表达天冬氨酸脱氢酶PaeAspDH,利用启动子PR表达编码天冬氨酸激酶III的抗反馈抑制的基因EclysC;所述载体pFT28上含有核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的pMB1复制子和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的温敏蛋白CI857;

所述载体pFT28是去除pFT24载体上的包括RBS的tetR基因和PLtetO1启动子,并将p15A复制子替换为具有高拷贝数的pMB1复制子得到的;

葡萄糖在反应体系中的初始浓度为40g/L;先以37℃的温度发酵4小时,再以42℃进行发酵;当发酵体系中的葡萄糖浓度低于15‑20g/L时,补加葡萄糖,使得反应体系中的葡萄糖浓度维持在15g/L‑25g/L。

2.权利要求1所述方法在制备四氢嘧啶中的应用。