利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2021111418942
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记,其特征在于:所述分子标记为巴氏新小绥螨NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因;

所述NbAkt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示,所述NbCYP3A16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示,所述NbCYP3A6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。

2.检测权利要求1所述的分子标记的引物组,其特征在于:包括检测巴氏新小绥螨NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因的引物组,检测NbAkt基因的引物组序列为:c38168.graph_c0‑F:5’‑AAAAGATAGCCGCTCAACTCG‑3’,c38168.graph_c0‑R:5’‑ATTTGATACGGTACACCCCTTG‑3’;

检测NbCYP3A16基因的引物组序列为:

c38004.graph_c0‑F:5’‑ACGACGAGCCACAGAAGC‑3’,c38004.graph_c0‑R:5’‑TGATAAGCGAGCGGATGA‑3’;

检测NbCYP3A6基因的引物组序列为:

c38045.graph_c0‑F:5’‑TGAAGAATAAAGCCGCAAACG‑3’;

c38045.graph_c0‑R:5’‑CGGGAAACGGAGGAGGAC‑3’。

3.一种检测权利要求1所述的分子标记的试剂盒,其特征在于:包括权利要求2所述的引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于:还包括总RNA提取试剂、RNA反转录试剂、内参基因ACTB扩增引物组、实时荧光定量PCR扩增试剂。

5.权利要求1所述的分子标记,或者权利要求2所述的引物组,或者权利要求3或4所述的试剂盒在检测巴氏新小绥螨对毒死蜱的抗性中的应用。

6.一种巴氏新小绥螨对毒死蜱抗性的分子标记的检测方法,其特征在于:包括如下步骤:提取待测巴氏新小绥螨成螨的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板,用权利要求2所述的引物组或者权利要求3所述的试剂盒进行实时荧光定量PCR扩增。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于:根据实时荧光定量PCR扩增结果,对比待测巴氏新小绥螨的NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因相对于敏感品系的表达量判断待测螨是否为毒死蜱抗性品系。

8.如权利要求7所述的方法,其特征在于:所述实时荧光定量PCR的反应体系为:ChamQ Universal SYBR qPCRMaster Mix 10μL,浓度10μM的正、反向引物各1μL,待测样本cDNA模板4μL,补充ddH2O至20μL。

9.如权利要求7所述的方法,其特征在于:所述实时荧光定量PCR的扩增程序为:95℃预变性3min;然后95℃变性10sec,55℃退火30sec,40个循环;

待测巴氏新小绥螨的NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因相对于敏感品系的表达量显著上调即判断为毒死蜱抗性品系。

10.如权利要求9所述的方法,其特征在于:待测巴氏新小绥螨的NbAkt基因和/或NbCYP3A16基因和/或NbCYP3A6基因相对于敏感品系的表达量倍数≥5即判断为毒死蜱抗性品系。