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专利号: 2014103503746
申请人: 西南大学柑桔研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记,该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述分子标记在巴氏新小绥螨对甲氰菊酯敏感品系和抗性品系分类中的应用。

3.扩增权利要求1所述分子标记的特异性正反性引物,其特征在于:所述引物序列如下:F:5’-CAACCTTTCACAGGCCAATC-3’;

R:5’-TTGCGTTGTAATACTTCTTCTG-3’。

4.一种巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记的检测方法,其特征在于:PCR扩增体系中采用的特异性正反向引物是根据权利要求1所述巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记的核苷酸序列设计的,所述特异性正反向引物扩增的区域在该标记的核苷酸序列上,该方法先提取待测巴氏新小绥螨的总RNA,将总RNA反转录得到cDNA,以cDNA为模板用所述特异性正反向引物进行PCR扩增,得到包含突变区域的钠离子通道基因片段,将得到的基因片段与上述巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记进行序列比对,即可判断该品系是对甲氰菊酯的敏感品系还是抗性品系,所述特异性正反向引物为:F:5’-CAACCTTTCACAGGCCAATC-3’;

R:5’-TTGCGTTGTAATACTTCTTCTG-3’。

5.根据权利要求4所述的一种巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记的检测方法,其特征在于:所述PCR体系为:PCR Master Mix25μL,正反向引物各2μL,待测样本cDNA模板50~100ng,补充ddH2O至50μL。

6.根据权利要求4或5所述的一种巴氏新小绥螨对甲氰菊酯抗性的分子标记的检测方法,其特征在于:所述PCR扩增的程序为:94℃预变性3min,然后94℃变性30sec,58℃退火

30sec,72℃延伸1min,35个循环,最后72℃延伸5min。