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专利号: 2021110048191
申请人: 常州大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种壳聚糖酶突变体,其特征在于,所述壳聚糖酶突变体为枯草芽孢杆菌壳聚糖酶发生点突变后形成的具有催化产壳寡糖功能的突变体,所述突变位置为编码枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的核苷酸序列上第121位脯氨酸进行定点突变;所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

2.根据权利要求1所述的基因,其特征在于,所述编码枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

3.根据权利要求1所述的壳聚糖酶突变体,其特征在于,当所述第121位脯氨酸突变为天冬酰胺时,壳聚糖酶突变体记为P121N;所述第121位脯氨酸突变为半胱氨酸时,壳聚糖酶突变体记为P121C;所述第121位脯氨酸突变为缬氨酸时,壳聚糖酶突变体记为P121V。

4.根据权利要求3所述的根据权利要求1所述的壳聚糖酶突变体,其特征在于,壳聚糖酶突变体P121N的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述壳聚糖酶突变体P121C的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;所述壳聚糖酶突变体P121V的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

5.一种基因,其特征在于,所述基因编码权利要求3所述的壳聚糖酶突变体。

6.一种重组载体,其特征在于,所述重组表达载体携带有权利要求3所述的壳聚糖酶突变体或权利要求5所述的基因。

7.一种重组菌,其特征在于,所述重组菌为转化/转染权利要求6所述的重组载体的宿主菌。

8.基于权利要求1所述的壳聚糖酶突变体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:以来自于能够甲基化的大肠杆菌宿主携带的壳聚糖酶基因的重组质粒为模板,以带有突变位点的寡聚核苷酸序列为引物,及逆行反向PCR,扩增突变质粒全长;使用DpnI限制性内切酶消化模板质粒;将经过DpnI限制性内切酶处理的PCR产物转化至E. coli DH5α感受态细胞,涂布于含有卡那霉素抗性的固体LB平板过夜培养;挑取单菌落接种至含有卡那霉素抗性的LB液体培养基,过夜培养后提取质粒并进行测序验证;将测序结果正确的质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,即得壳聚糖酶突变体。

9.基于权利要求1‑4或权利要求8中任一项所述的壳聚糖酶突变体在催化产壳寡糖上的应用。