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专利号: 2021109367711
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种分离并鉴定植物乳杆菌来源的抑制双菌生物膜的物质的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤(1):利用乙酸乙酯萃取植物乳杆菌发酵液发酵培养植物乳杆菌CCFM8724,收集发酵液,利用乙酸乙酯萃取多次,分别收集萃余相、萃取相,将萃取相浓缩得到乙酸乙酯萃取浸膏并用LC‑MS检测乙酸乙酯萃取浸膏中的成分;

步骤(2):利用硅胶柱层析和TLC对乙酸乙酯萃取浸膏中的成分进行分离、检测利用硅胶柱层析对乙酸乙酯萃取浸膏中的成分进行分离纯化,以氯仿、甲醇混合物作为洗脱剂,将洗脱物浓缩后利用TLC检测并合同相同组分、浓缩干燥;所述氯仿、甲醇混合物中氯仿、甲醇的体积比是95:5、90:10、85:15、80:20、70:30、60:40或50:50;

步骤(3):检测步骤(2)所得各成分抑制生物膜成膜的效果将变异链球菌、白色念珠菌的菌悬液混合,随后分别加入步骤(2)浓缩干燥得到的各成分,静置培养一段时间,检测生物膜的成膜情况,选择与阴性对照相比具有显著抑制效果的成分,利用GC‑MS进行鉴定;

步骤(4):GC‑MS鉴定其物质组成将步骤(3)所得具有显著抑制效果的成分进行衍生化,并将经过衍生化处理、没有经过衍生化处理的成分分别利用GC‑MS进行分析;

步骤(5):数据处理

将GC‑MS分析所得原始数据文件进行峰提取、保留时间校正、峰对齐等处理,得到代谢物的质谱信息、峰面积和保留时间在内的相关数据矩阵,将这些数据矩阵与数据库中的数据进行匹配,得到相应的化合物的结构信息。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,利用乙酸乙酯萃取3次。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,浓缩采用旋转蒸发。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,在96孔板中分别加入变异链球菌、白色念珠菌菌悬液各75μL,随后分别加入50μL步骤(2)所得各成分,于37℃静置培养

24h。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述衍生化是取步骤(2)中得到的干燥样品加入100μL的0.1mg/mL甲氧胺盐酸吡啶溶液,涡旋震荡30s,于37℃干式恒温金属浴90min,然后加入40μL的含1%TMCS的MSTFA试剂,于37℃金属浴30min,离心,吸取100μL上清液至内衬管中,进行GC‑MS鉴定。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述非衍生化,是取步骤(2)中的干燥样品加入100μL的乙醇,转移至内衬管中,进行GC‑MS鉴定。

7.根据权利要求1或5或6所述的方法,其特征在于,步骤(4)采用的GC‑MS的程序为:扫描的质量数范围为40–450m/z,离子源类型为EI源,程序升温:起始温度为150℃,保持1min,以10℃/min的升温速率提高至180℃,保持4min,后以15℃/min的升温速率提高至300℃,在此条件下维持17min;载气为氦气,流速1mL/min;电子电离能量:70eV;柱子型号为RTX‑5MS(30m×0.25mm×0.25μm)。

8.苯丙氨酸‑脯氨酸环二肽或3‑苯乳酸在制备用于抑制双菌生物膜的产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述产品包括:药品、日化用品、零食。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述日化用品包括:牙齿清洁用品。