1.一种产酸菌JC‑C,其特征在于,该菌株命名为:黄青霉(Penicillium chrysogenum)JC‑C,已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO:21423。
2.根据权利要求1所述的产酸菌JC‑C的培养方法,其特征在于,具体方法为:步骤1、菌株的分离培养
采集受重金属污染严重的土壤作为样品;
制备查式培养基:将蔗糖30g、NaNO3 3.0g、K2HPO4 1.0g、KCl 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20.0g、蒸馏水1L,混合后,于121℃高温灭菌20min,接着倒平板待其凝固,制成无菌的查式培养基,用来进行分离培养;
将采集的土壤样品与无菌水混合制备土壤悬液,土壤悬液经梯度稀释后涂布于培养基表面,并编号,于30℃恒温培养箱中培养3‑5d;
步骤2、鉴别产酸菌株
制备产酸鉴别培养基:将1.6%溴甲酚紫加入查式固体培养基中,在121℃高温灭菌20分钟,倒平板待其凝固后制成无菌鉴别培养基备用,其颜色为紫色;
将步骤1培养后的菌株取出,观察菌株形态,挑选出不同形态菌落划线培养于产酸鉴别培养基;
培养3‑5d后产酸鉴别培养基由紫色变为黄色则说明该菌株具有产酸能力,若无变化则说明该菌株不具有产酸能力,挑取具有产酸能力的菌株多次划线于产酸鉴别培养基中,获取纯化后的单一菌株;
3.根据权利要求1所述的产酸菌JC‑C在产酸中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,利用发酵培养基测定产酸菌JC‑C的产酸效率,所述发酵培养基采用蔗糖100.0g,NaNO3 1.5 g,KH2PO40.5g,KCl 0.025g,MgSO4·7H2O
0.025g,酵母浸膏1.6g,调节pH为4、于121℃灭菌20min;
6
将产酸菌JC‑C菌液按3.6×10个/50ml的比例加入发酵培养基,于温度为30℃、转速为
160rpm条件下在恒温振荡培养箱中进行培养。
2+
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,在发酵培养基中添加Zn 浓度≤400mg/L,
2+ 2+
或Pb 浓度≤2000mg/L时,或Cd 浓度≤200mg/L对产酸菌JC‑C的产酸效果基本无影响。
6.根据权利要求1所述的产酸菌JC‑C的鉴定方法,其特征在于,包括:利用18S rRNA基因序列对菌种鉴定和发酵培养基内发酵液中有机酸含量的测定。
7.根据权利要求6所述的产酸菌JC‑C的鉴定方法,其特征在于,利用18S rRNA对基因序列菌种鉴定具体为:
目标菌株18S rRNA基因序列的PCR扩增:通过真菌通用引物ITS1(5′‑TCCGTAGGTGAACCTGCGG‑3′)和ITS4(5′‑TCCTCCGCTTATTGATATGC‑3′)进行PCR扩增。在聚合酶的作用下,经预变性、变性、退火、延伸、
35个循环、修复延伸、获得目标菌株的18S rRNA基因序列。
8.根据权利要求6所述的产酸菌的鉴定方法,其特征在于,发酵培养基内发酵液中有机酸含量的测定具体为:
首先进行0.1mol/LNaOH标准溶液、1%酚酞指示剂的配置。然后准确吸取10.0mL样品发酵液,转移到100mL容量瓶中,加蒸馏水至100mL刻度并摇匀。用滤纸过滤,准确吸取滤液
20mL放入100mL三角瓶中,加入1%酚酞2滴,用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至初显粉色在
0.5min内不褪色为终点,记下氢氧化钠用量,重复取三次取平均值。并测定空白组消耗NaOH的含量。