1.一种检测甲基转移酶活性的光电化学生物传感器,其特征是,包括:传感电极,电极表面覆盖P型共价有机聚合物膜;
金纳米颗粒和双链DNA,所述双链DNA内设有识别位点,所述识别位点能够被甲基转移酶甲基化,所述双链DNA的一条单链DNA设置为用于连接所述P型共价有机聚合物膜,所述双链DNA的另一条单链DNA设置为用于连接金纳米颗粒;
内切酶,用于将未甲基化的双链DNA解链;
染料,所述染料能够插入至双链DNA的磷酸骨架中;
双链DNA由单链DNA1与单链DNA2杂交形成;
单链DNA1的序列为:CAC CTC CGG ACT G;
单链DNA2的序列为:CAG TCC GGAGGT G;
P型共价有机聚合物膜和金纳米颗粒分别位于双链DNA的两端;
只有当双链DNA存在时,才能将金纳米颗粒和染料结合,并与P型共价有机聚合物膜连接,产生SPR效应和染料敏化作用的协同,不仅能够提高检测灵敏度,而且是增强了检测稳定性和重现性。
2.如权利要求1所述的光电化学生物传感器,其特征是,双链DNA的一条单链DNA通过生物素与链霉亲和素的配合连接P型共价有机聚合物膜;P型共价有机聚合物膜表面设置链霉亲和素;
双链DNA的另一条单链DNA通过金‑硫键连接金纳米颗粒。
3.如权利要求1所述的光电化学生物传感器,其特征是,所述P型共价有机聚合物膜由
2,6‑二羟基萘‑1,5‑二甲醛和三(4‑氨基苯基)胺通过席夫碱反应获得;
传感电极的制备方法为:向电极表面滴加2,6‑二羟基萘‑1,5‑二甲醛溶液和三(4‑氨基苯基)胺溶液,进行反应;
2,6‑二羟基萘‑1,5‑二甲醛溶液和三(4‑氨基苯基)胺溶液中均含有均三甲苯、乙醇和醋酸;
所述电极为导电玻璃。
4.一种权利要求1~3任一所述的光电化学生物传感器在甲基转移酶活性检测中的应用。
5.一种甲基转移酶活性的检测方法,其特征是,提供权利要求1~3任一所述的光电化学生物传感器;
将双链DNA与待测含有甲基转移酶的溶液混合第一次孵育,再加入内切酶进行第二次孵育,然后加入传感电极、金纳米颗粒和染料进行混合反应,对反应后的传感电极进行光电化学检测。
6.如权利要求5所述的甲基转移酶活性的检测方法,其特征是,第一次孵育温度为36.5~37.5℃;孵育时间为30~150分钟。
7.如权利要求5所述的甲基转移酶活性的检测方法,其特征是,第二次孵育温度为36.5~37.5℃;孵育时间为30~150分钟。
8.如权利要求5所述的甲基转移酶活性的检测方法,其特征是,将第二次反应后的溶液滴加至传感电极上进行第三次孵育,再滴加金纳米颗粒进行第四次孵育,然后添加染料溶液进行第五次孵育。
9.一种权利要求1~3任一所述的光电化学生物传感器在筛选甲基转移酶激动剂和/或甲基转移酶抑制剂的应用。
10.一种甲基转移酶活性的检测试剂盒,其特征是,包括权利要求1~3任一所述的光电化学生物传感器、缓冲溶液。