1.一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,其特征在于,包括均相反应液、目标物、辅酶SAM、MTase链、限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链;
所述的均相反应液包括灭菌水、1×的Dam缓冲液;
所述的DNA链的序列如下:
MTase如SEQ No.1所示;
H1如SEQ No.2所示;
H2如SEQ No.3所示;
H3如SEQ No.4所示;
Signal probe如SEQ No.5所示;
所述的Signal probe序列 的5’端第三个碱基T上修饰饰猝灭基团Dabcyl,第五个碱基上修饰四氢呋喃碱基位点;3’端第5个碱基修饰荧光基团FAM。
2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的辅酶SAM为提供甲基化的辅酶。
3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的目标物为甲基转移酶Dam。
4.一种权利要求1所述的荧光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将目标物即甲基转移酶Dam、Dam缓冲液、MTase链以及提供甲基化的辅酶SAM同时加入到均相反应液中,反应结束后得到甲基化产物;
(2)向步骤(1)的甲基化产物中加入限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链、1×cutsmart反应缓冲液,完成甲基化切割以及催化发夹自组装反应;
(3)将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)中MTase链的加入量为
0.5μM;SAM的加入量为160μM,Dam的加入量为10U。
6. 根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)中甲基化产物、限制性内切酶Dpnl、1×cutsmart反应缓冲液、H1链、H2链、H3链、Signal probe的加入量比值为:
5 μL:1μL:2μL:1μM:1μM:1μM:5μM;所述的限制性内切酶Dpnl的浓度为20U/μL;所述的核酸内切酶的最终浓度为0.5U/μL。
7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)的反应条件为37℃,60 min。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)的反应条件为37℃,
90min。