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专利号: 2018116329642
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,其特征在于,包括均相反应液、目标物、辅酶SAM、MTase链、限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链;

所述的均相反应液包括灭菌水、1×的Dam缓冲液;

所述的DNA链的序列如下:

MTase如SEQ No.1所示;

H1如SEQ No.2所示;

H2如SEQ No.3所示;

H3如SEQ No.4所示;

Signal probe如SEQ No.5所示;

所述的Signal probe序列 的5’端第三个碱基T上修饰饰猝灭基团Dabcyl,第五个碱基上修饰四氢呋喃碱基位点;3’端第5个碱基修饰荧光基团FAM。

2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的辅酶SAM为提供甲基化的辅酶。

3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的目标物为甲基转移酶Dam。

4.一种权利要求1所述的荧光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将目标物即甲基转移酶Dam、Dam缓冲液、MTase链以及提供甲基化的辅酶SAM同时加入到均相反应液中,反应结束后得到甲基化产物;

(2)向步骤(1)的甲基化产物中加入限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链、1×cutsmart反应缓冲液,完成甲基化切割以及催化发夹自组装反应;

(3)将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)中MTase链的加入量为

0.5μM;SAM的加入量为160μM,Dam的加入量为10U。

6. 根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)中甲基化产物、限制性内切酶Dpnl、1×cutsmart反应缓冲液、H1链、H2链、H3链、Signal probe的加入量比值为:

5 μL:1μL:2μL:1μM:1μM:1μM:5μM;所述的限制性内切酶Dpnl的浓度为20U/μL;所述的核酸内切酶的最终浓度为0.5U/μL。

7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)的反应条件为37℃,60 min。

8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)的反应条件为37℃,

90min。