1.一种利用基因工程菌合成类胡萝卜素的方法,其特征在于,所述基因工程菌是在大肠杆菌中表达来源于Deinococcus xibeiensis R13菌株类胡萝卜素合成途径中的关键酶,所述关键酶是牻牛儿牻牛儿焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶、番茄红素β‑环化酶、C1',2'‑水合酶、C3',4'‑脱氢酶和C4‑酮基化酶,分别由基因crtE、crtB、crtI、crtLm、cruF、crtD和crtO编码;将合成类胡萝卜素的基因工程菌进行发酵培养,然后对发酵培养物进行分离提取得到类胡萝卜素,所述发酵培养的培养基中异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷(IPTG)添加量为0mM,总氮浓度在1.16g/L,总碳浓度在0.4g/L,利用胰蛋白胨为氮源,以果糖为碳源,所述发酵培养时间为36 h,温度30 ℃,pH为7;
关键酶基因crtE、crtB、crtI、crtLm、cruF、crtD和crtO的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑7所示;
基因工程菌的构建方法包括以下步骤:
(1)将关键酶基因crtE、crtB和crtI依次与表达载体pET Duet‑1连接,得到重组载体pET‑EBI,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中;
(2)将关键酶基因crtLm、cruF、crtD和crtO依次与表达载体pRSF Duet‑1连接,得到重组载体pRSF‑LmFDO,转化到步骤(1)含pET‑EBI 的重组菌中,构建得到基因工程菌EBILmFDO。
2.根据权利要求1所述的利用基因工程菌合成类胡萝卜素的方法,其特征在于,所述类胡萝卜素的分离提取方法包括以下步骤:(1)发酵培养结束后,于4℃、5000‑10000 rpm离心10‑15 min,收集菌体;
(2)用蒸馏水洗涤1‑2次,冷冻干燥获得干菌体,置于‑20℃环境中保存;
(3)称取干菌体,加入3 mol/L 盐酸溶液,置于摇床振荡1‑2 h;
(4)沸水浴煮3‑5 min,接着冰浴4‑6 min,离心弃上清液;
(5)蒸馏水洗涤1‑2次,加入1‑2 ml含1% 2,6‑二叔丁基对甲苯酚(BHT)的丙酮溶液,振荡至菌体无色;
(6)离心取上清液,经0.22 μM有机膜过滤,获得类胡萝卜素提取液。