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专利号: 2021104339698
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种用于同时鉴别7种肉源食品的PCR检测用引物组,其特征在于包括火鸡特异性引物对、鹅特异性引物对、猪特异性引物对、羊特异性引物对、牛特异性引物对、鸡特异性引物对和鸭特异性引物对,

所述的火鸡特异性引物对的序列为:正向引物:5’‑CTCTAGCCCAACCACCCAT‑ 3’,反向引物:5’‑GCGCCTAAGGTCTTTTCTATCAC‑ 3’;

鹅特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TTAGACGCGATAGAGACCCCA ‑ 3’,反向引物:5’‑ GTTCGCTCTCTTTAACTGCTTG ‑ 3’;

猪特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ CAGCCCGGAACCCTACTTG ‑ 3’,反向引物:5’‑ GTTCATCCAGTACCCGCTCC ‑ 3’;

羊特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ AGATATCGGCACCCTTTACCTTC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CTGCTCCGGCCTCAACCAT ‑ 3’;

牛特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ GTGCCTGATAATACTCTGACCAC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CACCCCAACCGAAACTACCAA ‑ 3’;

鸡特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TTTCGGCTCCCTATTAGCAGTC ‑ 3’,反向引物:5’‑ AGTATGAGAGTTAAGCCCAGA ‑ 3’;

鸭特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TGCCCTCAATAGCCTTCACC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CATACTTCTTTCCGTGTTGCC ‑ 3’。

2.一种用于同时鉴别7种肉源食品的PCR检测方法,其特征在于包括以下步骤:(1)样品DNA提取

根据基因组DNA提取试剂盒使用说明,进行基因组DNA提取;

(2)多重PCR引物设计

根据火鸡16S rRNA、鹅16S rRNA、猪细胞色素c氧化酶亚基I、绵羊细胞色素c氧化酶亚基I、黄牛16S rRNA、鸡细胞色素c氧化酶亚基I和鸭12S rRNA基因序列分别设计物种特异性引物;

(3)多重PCR反应条件

25 µL多重PCR反应体系:10×EasyTaq®反应缓冲液2.5 μL,2.5 mM dNTPs 2µL,Taq酶

0.6 µL,混合物种上下游引物均0.5 μL,基因组DNA 0.01‑10 ng,用无菌水补足体系;PCR反应程序为94℃ 5 min;94℃ 30 s、63℃ 30 s、72℃ 45 s共计34个循环;最后72℃延伸5 min;

(4)结果分析

PCR扩增反应结束后,将10 μL扩增产物与1 μL 10×上样缓冲液混合,用4%琼脂糖凝胶电泳检测,根据凝胶成像系统成像得到相应的电泳条带判断是否掺杂以及掺杂的肉类。

3.权利要求2所述的一种用于同时鉴别7种肉源食品的PCR检测方法,其特征在于所述的混合物种上下游引物包括火鸡特异性引物对、鹅特异性引物对、猪特异性引物对、羊特异性引物对、牛特异性引物对、鸡特异性引物对和鸭特异性引物对,所述的火鸡特异性引物对的序列为:正向引物:5’‑CTCTAGCCCAACCACCCAT‑ 3’,反向引物:5’‑GCGCCTAAGGTCTTTTCTATCAC‑ 3’;

鹅特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TTAGACGCGATAGAGACCCCA ‑ 3’,反向引物:5’‑ GTTCGCTCTCTTTAACTGCTTG ‑ 3’;

猪特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ CAGCCCGGAACCCTACTTG ‑ 3’,反向引物:5’‑ GTTCATCCAGTACCCGCTCC ‑ 3’;

羊特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ AGATATCGGCACCCTTTACCTTC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CTGCTCCGGCCTCAACCAT ‑ 3’;

牛特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ GTGCCTGATAATACTCTGACCAC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CACCCCAACCGAAACTACCAA ‑ 3’;

鸡特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TTTCGGCTCCCTATTAGCAGTC ‑ 3’,反向引物:5’‑ AGTATGAGAGTTAAGCCCAGA ‑ 3’;

鸭特异性引物对的序列为:

正向引物:5’‑ TGCCCTCAATAGCCTTCACC ‑ 3’,反向引物:5’‑ CATACTTCTTTCCGTGTTGCC ‑ 3’。