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专利号: 2021103660323
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一株维生素K3单克隆抗体杂交瘤细胞株YCH 2G8,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,分类命名为单克隆细胞株,保藏日期2020年9月27日,保藏编号CGMCC No.20785。

2.一种维生素K3单克隆抗体,其特征在于:其由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.20785的杂交瘤细胞株YCH 2G8分泌产生。

3.维生素K3半抗原的制备方法,其特征在于:将2‑甲基‑1,4‑萘醌,戊二酸,硝酸盐悬浮在乙腈溶液中,加热并搅拌至完全溶解;随后,滴加含过硫酸铵乙腈水溶液,滴加完成后搅拌,将反应混合物冷却至室温,得到棕黄色固体沉淀;乙酸乙酯萃取三次,浓缩合并的有机相,并通过制备柱纯化得到黄色固体2‑(3‑羧丙基)‑3‑甲基‑1,4‑萘醌,即维生素K3半抗原。

4.根据权利要求3所述维生素K3半抗原的制备方法,其特征在于步骤如下:将2‑甲基‑1,

4‑萘醌5.8mmol,戊二酸6mmol和硝酸盐6mmol悬浮在体积浓度为30%的乙腈溶液中,加热并搅拌至完全溶解;随后,在60min内滴加10mL含体积浓度为30%过硫酸铵的乙腈水溶液,滴加完成后65℃搅拌5min,将反应混合物冷却至室温,得到棕黄色固体沉淀;乙酸乙酯萃取三次,浓缩合并的有机相,并通过制备柱纯化得到黄色固体2‑(3‑羧丙基)‑3‑甲基‑1,4‑萘醌,即维生素K3半抗原。

5.维生素K3完全抗原的制备方法,其特征在于包括维生素K3免疫原:称取维生素K3半抗原,将其溶解在DMF中,然后加入1‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺,将该混合物在室温搅拌6h,得到反应液A;称取KLH,溶解于硼酸盐缓冲液中,得到溶液B;随后,逐滴将反应液A液加入到溶液B液中,室温反应,即得偶联物维生素K3‑KLH混合液,通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到维生素K3免疫原维生素K3‑KLH。

6.根据权利要求5所述维生素K3完全抗原的制备方法,其特征在于免疫原的制备方法具体为:称取2.6mg的维生素K3半抗原,将其溶解在800μL DMF中,然后加入5.75mg 1‑乙基碳二亚胺盐酸盐,3.45mg N‑羟基琥珀酰亚胺,该混合物在室温搅拌6h,得到反应液A;称取5mg KLH,溶解于0.1M硼酸盐缓冲液中,得到溶液B;随后,逐滴将反应液A液加入到溶液B液中,室温反应8h,即得偶联物维生素K3‑KLH混合液,通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到维生素K3免疫原维生素K3‑KLH。

7.维生素K3完全抗原的制备方法,其特征在于包括维生素K3包被原:取维生素K3半抗原,1‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺,用无水N,N‑二甲基甲酰胺溶解,得到A2液,室温搅拌反应;称取鸡卵清白蛋白OVA,溶解于硼酸盐缓冲溶液中,得到B2溶液,在室温条件下,逐滴将A2液加入到B2液中,室温反应,即得偶联物维生素K3‑OVA混合液,通过透析分离维生素K3包被原和未偶联的小分子半抗原,得到维生素K3包被原维生素K3‑OVA。

8.根据权利要求7所述维生素K3完全抗原的制备方法,其特征在于维生素K3包被原的制备方法具体为:称取1.73mg维生素K3半抗原,1‑乙基碳二亚胺盐酸盐3.83mg,N‑羟基琥珀酰亚胺2.30mg,用800μL无水N,N‑二甲基甲酰胺溶解,得到A2液,室温搅拌反应6h;称取5mg鸡卵清白蛋白OVA,溶解于2mL 0.1M硼酸盐缓冲溶液中,得到B2溶液,在室温条件下,逐滴将A2液加入到B2液中,室温反应8h,即得偶联物维生素K3‑OVA混合液,通过透析分离维生素K3‑OVA包被原和未偶联的小分子半抗原。

9.权利要求2所述维生素K3单克隆抗体的应用,其特征在于:建立维生素K3含量的免疫检测方法,应用于强化食品和饲料中维生素K3的检测。

10.根据权利要求9所述维生素K3单克隆抗体的应用,其特征在于:所述检测领域为强化食品和饲料。