1.一种混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,包括如下步骤:A、原料的预处理:将新鲜虾头干燥、粉碎,获得破碎后虾头粉;
B、菌株活化:取枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌分别进行固体斜面活化培养,获得斜面培养物;
C、种子液的准备:将所述斜面培养物进行扩大培养,获得种子液;
D、发酵培养基的制备、拌料与灭菌:所述破碎后虾头粉与培养液混合并灭菌,获得发酵培养基;
E、接种与固态发酵:将所述种子液与所述发酵培养基混合,开始固态发酵,从发酵时间
24~36小时开始,补加糖源,直至发酵结束,获得发酵物料;
F、肽的提取和分离:将所述发酵物料与酸剂混合,搅拌后经过滤、脱色、超滤、洗脱去杂,获得含ACE抑制肽的洗脱液;
G、浓缩、干燥制成成品:将所述洗脱液浓缩、干燥,获得含ACE抑制肽的虾头发酵多肽粉。
2.根据权利要求1所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,包括如下步骤:
A、原料的预处理:将所述新鲜虾头于60~70℃烘箱中干燥18~20小时至恒重,之后采用粉碎机破碎,过8~80目标准筛,获得所述破碎后虾头粉,颗粒粒径为0.2~2.5mm;
B、菌株活化:取所述枯草芽孢杆菌和所述地衣芽孢杆菌分别接种于斜面培养基,37~
40℃培养18~24小时,分别获得枯草芽孢杆菌斜面培养物和地衣芽孢杆菌斜面培养物;
C、种子液的准备:将所述枯草芽孢杆菌斜面培养物和所述地衣芽孢杆菌斜面培养物分别接种于种子液培养基,在37~40℃、200~300rpm条件下摇床培养18~30小时,之后加入7
适量无菌种子液培养基稀释,调整菌体浓度为1~50×10 CFU/mL,获得枯草芽孢杆菌种子液和地衣芽孢杆菌种子液,所述枯草芽孢杆菌种子液和所述地衣芽孢杆菌种子液混合获得所述种子液;
D、发酵培养基的制备、拌料与灭菌:所述破碎后虾头粉按每100g与30~80mL所述培养液混合,混匀后用0.5~0.6mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0~8.0,于121~125℃下灭菌15~
20min,获得所述发酵培养基;
E、接种与固态发酵:将所述种子液与所述发酵培养基混合,按每100g虾头粉接种5~
20mL所述种子液,在28~40℃、相对湿度60~100%条件下发酵,从发酵时间24~36小时开始,每12~24小时按每100g虾头粉加入灭菌后的20~25g/L葡萄糖溶液10~50mL,发酵至4~7天结束,获得所述发酵物料;
F、肽的提取和分离:将所述发酵物料按每100g与200~500mL浓度为0.05~0.08mol/L盐酸溶液混合,在150~200rpm搅拌、10~30℃条件下提取1~2小时,提取液经200~300目的滤布过滤后得到初滤液,按所述初滤液体积的0.3~0.5%加入活性碳,40~45℃吸附30~60分钟后再次过滤,之后采用5kDa的陶瓷膜进行超滤,保留分子量小于5kDa的组分,再采用1kDa的陶瓷膜进行第二次超滤,保留分子量小于1kDa的组分,合并收集小于1kDa的滤液上样于阳离子交换柱,待小肽完全吸附于柱上后,采用去离子水清洗柱子以去除非肽类杂质,然后用1~2mol/L氨水洗脱吸附在所述阳离子交换柱上的多肽,收集获得含ACE抑制肽的洗脱液;
G、浓缩、干燥制成成品:将所述洗脱液经低温真空浓缩、冷冻干燥,获得含ACE抑制肽的虾头发酵多肽粉。
3.根据权利要求2所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤C中,所述枯草芽孢杆菌种子液和所述地衣芽孢杆菌种子液按体积比1:0.5~3比例混合,获得所述种子液。
4.根据权利要求3所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌CMCC63501,所述地衣芽孢杆菌菌株为地衣芽孢杆菌AS1.269。
5.根据权利要求2所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤B中,所述斜面培养基包括:葡萄糖5~6g/L,胰蛋白胨10~12g/L,氯化钠5~6g/L,磷酸氢二钾2~3g/L,琼脂15~18g/L;调节pH为7.0~7.2,121~125℃灭菌15~20分钟。
6.根据权利要求2所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤C中,所述种子液培养基包括:葡萄糖10~20g/L,胰蛋白胨5~10g/L,酵母粉2~5g/L,氯化钠1~5g/L,磷酸氢二钾2~3g/L,pH为7.0~7.5,121~125℃灭菌15~20分钟。
7.根据权利要求2所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤D中,所述培养液包括碳源、氮源、无机盐、表面活性剂;所述碳源的浓度为5~60g/L,所述氮源的浓度为5~100g/L,所述无机盐的浓度为1~5g/L,所述表面活性剂的浓度为0.1~
1g/L。
8.根据权利要求7所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,所述碳源的浓度为10~30g/L。
9.根据权利要求7所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,所述碳源包括葡萄糖、甘露醇、淀粉中的一种或多种;所述氮源包括酵母浸粉、氯化铵中的一种或多种;所述无机盐包括磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸亚铁、氯化钙中的一种或多种;所述表面活性剂包括吐温80、表面活性素中的一种或多种。
10.根据权利要求2所述混合菌种固态发酵虾头制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤F中,所述阳离子交换柱为Dowex 50WX2。