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专利号: 2018100924987
申请人: 青岛海盈智高新技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-06-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:A.取新鲜贝肉蒸煮切碎后,置于-20℃冰箱冷冻,6h后转入真空冷冻干燥机中,冷冻干燥48h,粉碎过40目筛得贝肉干粉;

B.将贝肉干粉按料液比1:(3 4)加入蒸馏水进行匀浆,调节pH为6.3 7.0,然后加入40~ ~ ~

60mg/ml的磁性碳微球,高压灭菌20 30min后,得到培养基;

~

所述磁性碳微球的制备方法如下:

(1)将废豆渣与碳酸钾按照质量比1:2溶解于蒸馏水中,室温下浸渍4h,然后干燥至含水量为2% 5%,移入管式炉中,在400ml/min氮气保护下,以6℃/min的速率加热至600 650~ ~℃,保温75 100min,冷却后将样品洗至中性,干燥并磨成粉,过50 100目筛,得到活性碳粉~ ~末;

(2)按重量份数比,取1 3份Fe3O4微球和20 60份活性炭粉末,超声分散于15 45份蒸馏~ ~ ~水中,量取0.5 1.5份浓氨水加入上述体系中,超声搅拌10min;将上述混合液转移至反应釜~中,于180˚C高温反应4h,用磁铁分离并收集所得磁性碳微球,依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤若干次,于60˚C下烘干,得到磁性碳微球;

C.于培养基中接种8% 10%的复合菌液,在37 40℃,180 200r/min条件下摇床培养24~ ~ ~ ~

30h,得到发酵液;

所述复合菌液为枯草芽孢杆菌1389和黑曲霉AS3.350;

D.将发酵液巴氏灭菌后,在外加磁场下分离出磁性碳微球,然后用蒸馏水反复洗涤磁性碳微球至洗涤液中无蛋白物质,收集洗涤液;将洗涤液和分离磁性碳微球后的发酵液进行混合得到混合液,按照混合液:磁性二氧化硅体积比=1:2、流速1BV/h条件下通过磁性二氧化硅吸附柱进行吸附,将所得洗脱液进行冷冻干燥,即可得到ACE抑制肽;

所述磁性二氧化硅吸附柱制备方法如下:

(1)取Fe3O4微球超声分散于甲苯中,350rpm电动搅拌,分别缓慢加入甲苯体积3%~5%的正硅酸乙酯和三乙胺,室温下搅拌反应24h,用磁铁分离并收集所得磁性二氧化硅微球,依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤若干次,于60˚C下烘干,得到磁性二氧化硅微球;

所述体系中Fe3O4微球含量为4mg/ml甲苯;正硅酸乙酯和三乙胺加入量比为1:1;

(2)按重量份数比,称取20 40份磁性二氧化硅微球超声分散于400 600份pH为8.2的~ ~Tris-HCl缓冲液中,350rpm电动搅拌,然后向体系中缓慢加入3-(异丁烯酰基)丙基三甲氧基硅烷(MPS)和正硅酸乙酯(TEOS),室温下反应16h,用磁铁分离并收集所得丙烯酰基改性磁性二氧化硅微球,依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤若干次,于60˚C下烘干,得到氨基改性磁性二氧化硅微球;

所述3-(异丁烯酰基)丙基三甲氧基硅烷(MPS)和正硅酸乙酯(TEOS)用量比为(1 2):1;

~

体系中Fe3O4微球:3-(异丁烯酰基)丙基三甲氧基硅烷(MPS)=1mg:2 4ml;

~

(3)将上述氨基改性磁性二氧化硅微球填充于吸附柱中,填充量为80% 90%,得到二氧~化硅吸附柱。

2.根据权利要求1所述的一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,所述Fe3O4微球制备方法如下:按重量份数比,称取2~4份FeCl3·6H2O溶于60~80份乙二醇中,添加6~8份无水醋酸钠,再加入2 4份聚乙二醇,超声5min,磁力搅拌15min,将反应混合液加入高压反应釜,180˚C高~温反应8h,用磁铁分离磁源微粒(Fe3O4)产品,依次用无水乙醇,水洗涤3~5次,60˚C烘干,得到Fe3O4微球。

3.根据权利要求1所述的一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤C所述复合菌液中枯草芽孢杆菌1389和黑曲霉AS3.350比值为2:1。

4.根据权利要求1所述的一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,所述磁性碳微球的制备方法中,Fe3O4微球和活性炭粉末质量比为1:20,蒸馏水和浓氨水体积比为

30:1,蒸馏水加入量为15ml/g活性炭粉末。

5.根据权利要求1所述的一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,步骤D中磁性二氧化硅吸附柱进行吸附2 3个生产周期后,利用2BV/h的蒸馏水洗涤吸附柱,收集洗脱~液,干燥成粉末,然后加入到步骤B中与贝肉干粉混合制备培养基,加入量为贝肉干粉量的

65 80%。

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