1.一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)红曲霉液态发酵:使用斜面活化培养基培养红曲菌种,进行活化;取培养后的斜面种子一支,将菌体及孢子洗脱至生理盐水中制成混合液,按二级液体种子培养基体积的
10%的接种量接种到装有二级液体种子培养基,于200rpm,30℃培养48h~72h;将二级液体种子按发酵培养基体积的10%的接种量接种到发酵培养基中于30℃,200rpm培养5d,得到红曲霉菌丝体;其中红曲霉采用中国典型培养物保藏中心保藏的,保藏编号为CCTCC NO:M2013082的红曲菌种;
二级液体种子培养基质量比配方为:大米粉3%,硝酸钠0.5%,磷酸二氢钾0.25%,硫酸镁0.1%,其余为去离子水,使用乳酸调节pH 5.5~6;
发酵培养基质量比配方为:葡萄糖4%,蛋白胨2%,可溶性淀粉3%,硝酸钠0.2%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.2%,其余为去离子水,使用乳酸调节pH 5.5~6;
(2)获得菌体干粉:用去离子水清洗红曲霉菌丝体,过滤去除滤液,菌体置于-80℃冰箱冷冻12h,调节冷冻干燥机条件为-85℃,真空度-0.01mPa,将菌体进行真空冷冻干燥得到菌体干粉;
(3)酶解处理:称取一定量红曲菌体干粉,加入菌体干粉100倍重量的去离子水,加入质量为菌体干粉原料0.3%的碱性蛋白酶,调节pH至7-8.5,保温酶解2h;酶解结束后,将水浴锅的温度调至90℃,保温维持15min,除去酶解液中碱性蛋白酶的活性;温度降低至50℃以下时,向灭活了蛋白酶的红曲菌体蛋白水解液中加入菌体干粉原料质量的0.2%的木瓜蛋白酶,保持酶解温度在50℃-60℃,调节pH在6-7,维持1h;调节水浴锅的温度至90℃,维持
15min,灭活木瓜蛋白酶的酶活性;加入菌体干粉原料质量的0.3%的胃蛋白酶,保持酶解温度在30℃-40℃,调节pH在3-4,维持1.5h;
(4)后处理:对酶解液进行减压蒸发浓缩,得到红曲多肽浓缩液,对浓缩后的酶解液进行真空冷冻干燥,即得到对ACE有抑制活性的红曲多肽产品。