1.一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)红曲霉液态发酵:使用斜面活化培养基培养红曲菌种,进行活化;取培养后的斜面种子一支,将菌体及孢子洗脱至生理盐水中制成混合液,按 10%的接种量接种到装有二级液体种子培养基,于 200rpm,30℃培养 48h~72h;将二级液体种子按 10%的接种量接种到发酵培养基中于 30℃,200rpm 培养5d,得到红曲霉菌丝体;
(2)获得菌体干粉:用去离子水清洗红曲霉菌丝体,冷冻干燥得到菌体干粉;
(3)酶解处理:称取一定量红曲菌体干粉,加入适量的水和碱性蛋白酶,调节pH至碱性,保温酶解一段时间;酶解一段时间后,对酶解液中的蛋白酶进行灭活;降温后向灭活后的红曲酶解液中加入木瓜蛋白酶,调节pH,保温酶解一段时间;酶解完成后加热一段时间,灭活木瓜蛋白酶,红曲酶解液中加入胃蛋白酶,调节pH,保温酶解一段时间;对酶解液进行抽滤,收集酶解液;
(4)后处理:对酶解液进行减压蒸发浓缩,得到红曲多肽浓缩液,对浓缩后的酶解液进行真空冷冻干燥,即得到对ACE有抑制活性的红曲多肽产品。
2.根据权利要求1所述的红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法,其特征在于所述的步骤(1)中的二级液体种子培养基配方为:大米粉 3%,硝酸钠 0.5%,磷酸二氢钾 0.25%,硫酸镁 0.1%,使用乳酸调节pH 5.5~6。
3.根据权利要求1所述的红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法,其特征在于所述的步骤(1)中的发酵培养基配方为:葡萄糖 4%,蛋白胨 2%,可溶性淀粉3%,硝酸钠 0.2%,磷酸二氢钾 0.1%,硫酸镁 0.2%,使用乳酸调节pH 5.5~6。
4.根据权利要求1所述的红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法,其特征在于所述的步骤(3)中的碱性蛋白酶的加入量占原料红曲菌体干粉的0.3%,加水量是红曲菌体干粉的
100倍重量,即用电子天平称取蛋白酶加入其中,加碱性蛋白酶前要根据酶的最适pH调节酸碱范围,调节pH至7-8.5;调节水浴蛋白酶酶解的最适温度50℃-60℃,保温酶解2h,酶解结束后,将水浴锅的温度调至90℃,保温维持15min,除去酶解液中碱性蛋白酶的活性;
温度降低至50℃以下时,向灭活了蛋白酶的红曲菌体蛋白水解液中加入原料质量0.2%的木瓜蛋白酶,保持酶解温度在50℃-60℃,调节pH在6-7,维持1h;调节水浴锅的温度至
90℃,维持15min,灭活木瓜蛋白酶的酶活性;加入原料质量0.3%的胃蛋白酶,保持酶解温度在30℃-40℃,调节pH在3-4,维持1.5h。