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专利号: 2020111916680
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效生产戊二酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌是在大肠杆菌宿主菌中过表达了赖氨酸脱羧酶cadA、丁二胺转氨酶patA、γ-氨基丁醛脱氢酶patD、4-氨基丁酸转氨酶gabT和琥珀酸半醛脱氢酶gabD。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述赖氨酸脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;丁二胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;γ-氨基丁醛脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;4-氨基丁酸转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示;

琥珀酸半醛脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述丁二胺转氨酶通过核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的核糖体结合位点与表达载体相连,所述γ-氨基丁醛脱氢酶是通过核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的核糖体结合位点与表达载体相连。

4.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述大肠杆菌宿主菌为大肠杆菌E.coli W3110、E.coli MG1655、E.coli B0013或E.coli ATCC 8739。

5.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述表达载体为pETM6R1、pCDR或pCOR。

6.一种权利要求1-5任一项所述重组大肠杆菌的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)获得赖氨酸脱羧酶cadA、丁二胺转氨酶patA、γ-氨基丁醛脱氢酶patD、4-氨基丁酸转氨酶gabT和琥珀酸半醛脱氢酶gabD的单基因表达载体;

(2)将步骤(1)得到的单基因表达载体采用ePathBrick技术对路径酶进行组装,得到重组质粒;

(3)将步骤(2)所得的重组质粒转化到大肠杆菌宿主中,得到大肠杆菌重组菌。

7.权利要求1-5任一项所述重组大肠杆菌在生产戊二酸中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述应用具体是将所述重组大肠杆菌按照

5-10%的接种量接种至发酵培养基中进行培养,培养4-8h,添加0.1-0.4mmol/L的IPTG进行诱导,诱导温度为25-30℃;在发酵过程中,当溶氧急剧上升,开始进行葡萄糖补料,并每隔

10-20h补加L-赖氨酸持续至发酵结束。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵培养基包括如下组分:葡萄糖40-

60g/L,蛋白胨15-25g/L,酵母提取物5-15g/L,十二水磷酸氢二铵2-3g/L,磷酸二氢铵0.5-

1.5g/L,氯化钾0.1-0.2g/L,七水硫酸镁0.2-0.4g/L,和0.5-1.5mL微量金属溶液。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述微量金属溶液包括如下组分:六水氯化铁2-3g/L,六水氯化钴0.2-0.4g/L,氯化铜0.2-0.4g/L,四水氯化锌0.2-0.4g/L,高锰酸钠0.2-0.4g/L,硼酸0.07-0.08g/L,和四水氯化锰0.4-0.6g/L。