1.一种双酶偶联合成(R)‑香茅醇的方法,其特征在于所述方法为:以含醇脱氢酶YsADH基因的工程菌和含老黄酶OYE2y‑HG基因的工程菌各自经发酵培养获得的湿菌体混合后作+为催化剂,以香叶醇为底物,以NADP为辅酶,以pH 6‑9缓冲液为反应介质构成反应体系,在
25‑55℃、0‑600rpm条件下反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(R)‑香茅醇;
所述含醇脱氢酶YsADH基因的工程菌是将醇脱氢酶YsADH基因导入大肠杆菌构建获得的;所述醇脱氢酶YsADH基因核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示;
所述含老黄酶OYE2y‑HG基因的工程菌是将老黄酶OYE2y‑HG基因导入大肠杆菌构建获得的;所述老黄酶OYE2y‑HG基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述含醇脱氢酶YsADH基因工程菌的湿菌体与含老黄酶OYE2y‑HG基因工程菌的湿菌体以质量比0.25‑6:1混合;所述催化剂加入量以湿菌体总量计为200g/L。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述底物以1M香叶醇乙醇溶液形式加入,所述香叶醇加入终浓度为10‑100mM,所述辅酶加入终浓度为0.4mM。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述缓冲液为pH 7.5的50mM Tris‑HCl缓冲液,反应条件为40℃、400rpm下反应6h。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述含醇脱氢酶YsADH基因工程菌的湿菌体按如下方法制备:将含醇脱氢酶YsADH基因工程菌接种于含有终浓度100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,在37℃和200rpm下培养过夜,然后以体积浓度2%的接种量转接于含有100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,在37℃和200rpm培养至菌体浓度OD600至0.6~0.8,向培养物中加入终浓度0.2mM的IPTG,在21℃下诱导培养12h,获得诱导培养液;再将诱导培养液于4℃和8000rpm下离心10min,弃去上清液;然后用pH 8.0、50mM Tris‑HCl缓冲液重悬菌体,于4℃和8000rpm下离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述含老黄酶OYE2y‑HG基因工程菌的湿菌体按如下方法制备:将含老黄酶OYE2y‑HG基因工程菌接种于含有终浓度100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基中,在37℃和200rpm下培养过夜,以体积浓度2%的接种量转接于终浓度100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基中,在37℃和200rpm培养至菌体浓度OD600至0.6~0.8,向培养物中加入终浓度0.2mM的IPTG,在24℃下诱导培养12h,获得诱导培养液;再将诱导培养液于4℃和8000rpm下离心10min,弃去上清液;然后用pH 8.0、50mM Tris‑HCl缓冲液重悬菌体,于4℃和8000rpm下离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述反应液分离纯化方法为:反应液在
12000rpm下离心2min,取上清,加入4倍反应液体积的乙酸乙酯,在200rpm和30℃条件下萃取1h,萃取结束后,在12000rpm下离心1min,取上层有机相,经减压蒸馏去除乙酸乙酯,最终获得(R)‑香茅醇。