1.一种R‑ω‑转氨酶与乙醇脱氢酶偶联合成(R)‑1‑[3,5‑双(三氟甲基)苯基]乙胺的方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：以R‑ω‑转氨酶和乙醇脱氢酶为双酶催化剂，以+

3,5‑双三氟甲基苯乙酮为氨基受体，以异丙胺盐酸盐为胺供体，以磷酸吡哆醛和NAD为辅助因子，加入助溶剂，以pH7‑10的缓冲液为反应介质构成反应体系，在30 ‑50 ℃、150‑200 rpm摇床中混合搅拌反应12‑36 h，反应液分离纯化，获得(R)‑1‑[3,5‑双(三氟甲基)苯基]乙胺；所述助溶剂为乙醇、甘油或二甲基亚砜；所述3,5‑双三氟甲基苯乙酮加入量以反应体系体积计为25‑170mmol/L；所述异丙胺盐酸盐加入量以反应体系体积计为125‑850 mmol/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应体系中，R‑ω‑转氨酶加入量以反应体系体积计为1‑2U/mL；所述乙醇脱氢酶加入量以反应体系体积计为1‑2U/mL；所述磷酸吡+哆醛加入量以反应体系体积计为0.5‑1.5mmol/L；所述NAD 加入量以反应体系体积计为

0.5‑1.5 mmol/L；所述助溶剂加入量以反应体系体积计为10%‑30%。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述R‑ω‑转氨酶是将含R‑ω‑转氨酶基因的工程菌经发酵培养的湿菌体超声破碎提取的纯酶，所述R‑ω‑转氨酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示；所述纯酶以水溶液形式加入。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述工程菌的构建是将R‑ω‑转氨酶基因插入pETduet‑1表达载体BamHI和XhoI限制性位点之间并转化大肠杆菌BL21(DE3)构建而成。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述R‑ω‑转氨酶的纯酶按如下步骤制备：

（1）诱导培养：将含R‑ω‑转氨酶基因的工程菌接种至含有30‑80 µg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37 ℃、180 rpm培养过夜，获得种子液；再将种子液按体积浓度1%‑5%接种量转接到新鲜含30‑80 µg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37 ℃、180 rpm培养至OD600为

0.6‑0.9，加入终浓度为0.5‑1.5 mM的异丙基‑β‑硫代半乳糖苷，转移到16‑26 ℃诱导表达

10‑20 h，离心，收集细胞沉淀，用0.9% 生理盐水洗涤，收集湿菌体细胞；（2）粗酶液：将步骤（1）收获的湿菌体细胞重悬于pH 7.0、100 mM磷酸钠缓冲液中，超声破碎5分钟，功率400 W，工作3秒，破碎7秒，收集破碎液，离心，取上清液，即得到转氨酶粗酶液；（3）纯酶：将转氨酶粗酶液与层析介质混匀，然后上样到 BeyoGold™ His‑tag 层析柱，先用非变性洗涤液洗柱5次去除杂蛋白，每次洗脱1‑2个柱体积；然后用非变性洗脱液洗脱6 10次，每次洗脱1‑2~个柱体积，收集含有目标蛋白的洗脱液，超滤浓缩，冻干，获得R‑ω‑转氨酶的纯酶；非变性洗涤液是含300 mM NaCl 和 2 mM 咪唑的pH8.0、50 mM 磷酸钠缓冲液；非变性洗脱液是含

300 mM NaCl 和50 mM 咪唑的pH8.0、50 mM 磷酸钠缓冲液。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述乙醇脱氢酶是将含乙醇脱氢酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体超声破碎提取的纯酶，所述乙醇脱氢酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述工程菌的构建是将乙醇脱氢酶基因插入pET‑28a(+)表达载体BamHI和XhoI限制性位点之间并转化大肠杆菌BL21(DE3)构建而成。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于乙醇脱氢酶的纯酶按如下方法制备：（1）诱导培养：将乙醇脱氢酶基因工程菌接种至含30‑80µg/mL Kan抗生素的 LB液体培养基，放置于

37 ℃、180 rpm摇床中过夜培养得到种子液；按体积浓度1‑5%的接种量转接到含30‑80 µg/mL Kan的LB液体培养基中，继续在37 ℃、180 rpm条件下培养到OD600为0.6‑0.9，再加入终浓度为0.5‑1.5mM的IPTG，23 ℃、180 rpm条件下诱导表达10‑20h后，离心，收集细胞沉淀，用0.9% 生理盐水洗涤， 离心，收集湿细胞；（2）粗酶液：将收获的湿细胞重悬于pH 7.0、100 mM磷酸钠缓冲液中，在冰浴条件下将混合物超声5分钟，功率400 W，工作3秒，破碎7秒，收集超声后的破碎液，离心，取上清液，即得到乙醇脱氢酶粗酶液；（3）纯酶液：将乙醇脱氢酶粗酶液与层析介质按体积比8:1混匀，然后上样到 BeyoGold™ His‑tag 层析柱，先用非变性洗涤液洗柱5次去除杂蛋白，每次洗脱1‑2个柱体积；然后用非变性洗脱液洗脱6 10次，每次~洗脱1‑2个柱体积，收集含有目标蛋白的洗脱液，超滤浓缩，冻干，获得R‑ω‑转氨酶的纯酶；

非变性洗涤液是含300 mM NaCl 和 2 mM 咪唑的pH8.0、50 mM 磷酸钠缓冲液；非变性洗脱液是含300 mM NaCl 和50 mM 咪唑的pH8.0、50 mM 磷酸钠缓冲液。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应体系还包括金属离子和试剂，所述金

2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ + +

属离子和试剂为Ca 、Mg 、Cu 、Fe 、Zn 、Mn 、Na、K或EDTA。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于所述金属离子和试剂在反应体系中的加入终浓度分别为10 mM。