1.一种酪氨酸酚裂解酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第402位或第409位进行易错PCR单突变获得的。
2.如权利要求1所述酪氨酸酚裂解酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第402位赖氨酸突变为苏氨酸或第409位苏氨酸突变为丙氨酸。
3.一种由权利要求1所述酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因构建的基因工程菌。
4.一种权利要求1所述酪氨酸酚裂解酶突变体在合成左旋多巴中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:以含酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以邻苯二酚、丙酮酸钠和乙酸铵为底物,以亚硫酸钠和EDTA·Na2为助剂,以磷酸吡哆醛为辅酶,以pH 6.0~10.5的缓冲液为反应介质构成转化体系,在温度5~30℃、转速100~200rpm条件下进行转化反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得左旋多巴。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述转化体系中,邻苯二酚加入终浓度5~
50g/L,丙酮酸钠加入终浓度5~50g/L,乙酸铵加入终浓度0.1~1.4M,亚硫酸钠加入终浓度
0.5~10g/L,EDTA·Na2加入终浓度0.5~10g/L,磷酸吡哆醛加入终浓度0.05~5mM,湿菌体用量为2~50g/L。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述转化反应过程中对邻苯二酚、丙酮酸钠和乙酸铵进行补料,每隔0.5~4h补料一次,其中邻苯二酚每次补料0.1~10g/L,丙酮酸钠每次补料0.1~10g/L,醋酸铵每次补料1~20g/L。
8.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:
(1)斜面培养:将含酪氨酸酚裂解酶突变体编码基因的工程菌接种至含50μg/ml卡那霉素的斜面培养基,在37℃培养8~16h,获得斜面菌体;所述斜面培养基终浓度组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,2%琼脂,溶剂为蒸馏水,pH 7.0;
(2)种子培养:将斜面菌体接种至种子培养基,在37℃培养8~10h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,50μg/ml卡那霉素,溶剂为蒸馏水,pH 7.0;
(3)发酵培养:将种子液以体积浓度2%的接种量接种至无菌的装有3L发酵培养基的5L机械搅拌通风通用式发酵罐中,将已灭菌的乳糖以终浓度为15g/L的量直接添加到发酵罐中于28℃下诱导培养6~8h后,放罐收集湿菌体;所述发酵培养基终浓度组成为:蛋白胨
25g/L,酵母粉6.55g/L,NaCl 10g/L,蔗糖9.1g/L,磷酸吡哆醛0.05mM,MgSO45mM,KH2PO4
10mM,溶剂为蒸馏水,pH自然。