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专利号: 2020109988568
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记,其特征在于:该分子标记为YTU19-005;分子标记YTU19-005的上游引物为YTU19-005-F,其核苷酸序列如SEQ ID NO:

1所示;分子标记YTU19-005的下游引物为YTU19-005-R,其核苷酸序列如SEQ ID N:2所示;

以所述分子标记YTU19-005的上、下游引物对小麦基因组DNA进行PCR扩增,电泳、分离,获得分子量为210bp的扩增产物,即为与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记。

2.根据权利要求1所述的与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记,其特征在于:所述PCR扩增的体系为20μL,包含30-50 ng/μL小麦基因组DNA 2.0 μL,10×PCR buffer 2.0μL,10 mM dNTP 0.4μL,10 mM MgCl2 2.0μL,5U Taq聚合酶0.4μL,2 μM上游引物0.8μL,2 μM下游引物0.8μL,无菌去离子水11.6μL。

3.根据权利要求1所述的与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记,其特征在于:所述PCR扩增的程序为:94℃预变性5分钟;94℃变性30秒,55℃退火30秒,延伸40秒,

38个循环;72℃延伸5min;4℃保存。

4.根据权利要求1、2或3所述的与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记,其特征在于,所述电泳指在质量体积比为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上180 V恒压下电泳1.0-

1.5 h。

5.一种权利要求1-3所述的任意一项所述的与小麦抗白粉病基因PmLS5082紧密连锁的分子标记在小麦抗白粉病基因PmLS5082的分子定位、图位克隆、检测和分子标记辅助选择育种中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,检测待测小麦品种中是否携带抗白粉病基因PmLS5082主要包括以下步骤:(1)从待测小麦样品的新鲜叶片提取基因组DNA;

(2)利用分子标记YTU19-005的引物对所述小麦基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物;

(3)对扩增产物进行电泳、分离,若能扩增出分子量大小为210 bp的特异条带,说明待测小麦携带抗白粉病基因PmLS5082;否则,待测小麦中不携带小麦抗白粉病基因PmLS5082。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述分子标记YTU19-005的标记引物包括上游引物YTU19-005-F和下游引物YTU19-005-R,所述上游引物YTU19-005-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,所述下游引物YTU19-005-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述PCR扩增的体系为20μL,包含

30-50 ng/μL小麦基因组DNA 2.0 μL,10×PCR buffer 2.0μL,10 mM dNTP 0.4μL,10 mM MgCl2 2.0μL,5U Taq聚合酶0.4μL,2 μM上游引物0.8μL,2 μM下游引物0.8μL,无菌去离子水11.6μL。

9.根据权利要求6、7和8所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增的程序为:94℃预变性5分钟;94℃变性30秒,55℃退火30秒,延伸40秒,38个循环;72℃延伸5min;4℃保存。