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专利号: 2020108156916
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于扩增与小麦抗白粉病基因Pm68紧密连锁的分子标记的引物对,其特征在于,所述分子标记为Xdw15;所述分子标记Xdw15的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述分子标记Xdw15的下游引物核苷酸序列如SEQ ID N:2所示;以所述分子标记Xdw15的上、下游引物对待测小麦基因组DNA进行PCR扩增,电泳分离,获得对应的扩增产物分子量为100bp。

2.一种权利要求1所述的用于扩增与小麦抗白粉病基因Pm68紧密连锁的分子标记的引物对在小麦抗白粉病基因Pm68的检测和辅助选育抗白粉病基因Pm68的小麦中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,检测待测品种中是否携带小麦抗白粉病基因Pm68主要包括以下步骤:(1)从待测小麦样品的新鲜叶片提取基因组DNA;

(2)利用扩增的分子标记Xdw15的引物对对所述小麦基因组DNA进行PCR扩增;

(3)对扩增产物进行电泳、检测,若能扩增出100bp的特异条带,说明待测小麦携带抗白粉病基因Pm68。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述PCR扩增的体系为25μL,包括:

30ng/μL 50ng/μL小麦基因组DNA 2.5μL,10×PCR buffer 2.5μL,10mM dNTP 0.5μL,10mM ~MgCl2 6.75μL,5U Taq聚合酶0.2μL,2μM上游引物1.0μL,2μM下游引物1.0μL,无菌去离子水

10.55μL。

5.根据权利要求3或4所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增的程序为:94℃预变性3分钟;94℃变性20秒,60℃退火30秒,延伸60秒,35个循环;72℃延伸5分钟;4℃保存。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)所述电泳是在质量体积比为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上180 V恒压下电泳1.0小时 1.5小时。

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