利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020101251816
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-07
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种源于簇毛麦的小麦抗白粉病基因Pm21的KASP分子标记,其特征在于,所述KASP分子标记为KASP-Pm21,其KASP分子标记KASP-Pm21的引物包括簇毛麦等位型上游引物KASP-Pm21-F、小麦等位型上游引物KASP-Pm21-H以及共用下游引物KASP-Pm21-C;

所述簇毛麦等位型上游引物KASP-Pm21-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

所述小麦等位型上游引物KASP-Pm21-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;

所述共用下游引物KASP-Pm21-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.一种权利要求1所述的源于簇毛麦的小麦抗白粉病基因Pm21的KASP分子标记在分子标记辅助选择育种中的应用。

3.一种权利要求1所述的源于簇毛麦的小麦抗白粉病基因Pm21的KASP分子标记在鉴定小麦品种或品系中是否携带源于簇毛麦的小麦抗白粉病基因Pm21中的应用。

4.一种小麦品种或品系中是否携带小麦抗白粉病基因Pm21的鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)提取待测样品的DNA,作为模板;

(2)利用所述KASP分子标记KASP-Pm21的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物;所述KASP分子标记KASP-Pm21的引物包括簇毛麦等位型上游引物KASP-Pm21-F、小麦等位型上游引物KASP-Pm21-H以及共用下游引物KASP-Pm21-C;

(3)采用荧光定量PCR检测仪分析PCR扩增产物基因型;37℃测量荧光信号,Bio-Rad CFX Manager 3.1读取分型结果;分型结果中若等位型为Allele1/Allele1则为簇毛麦的基因型或/和携带基因Pm21载体的基因型,若等位型为Allele1/Allele2则为小麦中携带抗白粉病基因Pm21的基因型,若等位型为Allele2/Allele2则为不含抗白粉病基因Pm21的小麦的基因型。

5.根据权利要求4所述的小麦品种或品系中是否携带小麦抗白粉病基因Pm21的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中所述簇毛麦等位型上游引物KASP-Pm21-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述小麦等位型上游引物ASP-Pm21-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述共用下游引物KASP-Pm21-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求4或5所述的小麦品种或品系中是否携带小麦抗白粉病基因Pm21的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中所述PCR扩增的反应体系为:120 ng/μL DNA 6.0μL,2×KASP Maseter Mix 10.0μL,引物混合液 0.24μL,ddH2O 3.76μL,总体系为20.0μL;其引物混合液中所述黑麦等位型上游引物KASP-Pm21-F和小麦等位型上游引物KASP-Pm21-H的浓度均为12μM;共用下游引物KASP-Pm21-C的浓度为30 μM。

7.根据权利要求6所述的小麦品种或品系中是否携带小麦抗白粉病基因Pm21的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中所述PCR扩增的程序为:94℃预变性15分钟;94℃变性20秒,64℃梯度退火并延伸60秒,10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃;94℃变性20秒,58℃退火并延伸60秒,38个循环。