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专利号: 2020109867258
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种生物催化制备(R)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的方法,其特征在于所述方法为:

以重组大肠杆菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以间三氟甲基苯乙酮为底物,加入辅助底物,以pH 6.0~8.0磷酸缓冲液为反应介质构成转化体系,于20~40℃、200rpm条件下进行生物催化不对称还原反应,反应结束后,反应液经分离纯化得到(R)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇;所述辅助底物为葡萄糖、甘油、麦芽糖、乳糖、异丙醇、乙醇或正丁醇中的一种;所述重组大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a(+)-LXCAR。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述催化剂加量以转化体系总体积计为20~

160g/L;所述底物加量以转化体系总体积计为50~400mmol/L;所述辅助底物为葡萄糖、麦芽糖、乳糖时,加入量以转化体系总体积计为100g/L;所述辅助底物为甘油时,加入量以转化体系总体积计为60g/L;所述辅助底物为异丙醇、乙醇或正丁醇时,体积加入量以转化体系总体积计为5~30%。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述转化体系由催化剂、底物、辅助底物、低共熔溶剂和磷酸缓冲液构成;所述低共熔溶剂组成中的氢键受体和氢键供体的摩尔比为1:1;

所述氢键受体为氯化胆碱、甜菜碱、L-肉碱、L-脯氨酸中的一种,所述氢键供体为天然氨基酸、异丙醇、尿素、果糖、海藻糖、葡萄糖、甘油中的一种。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于所述低共熔溶剂加入量以转化体系总体积计为1~10%。

5.如权利要求3所述的方法,其特征在于所述低共熔溶剂为下列之一:氯化胆碱:赖氨酸、氯化胆碱:尿素、氯化胆碱:异丙醇、氯化胆碱:甘氨酸、氯化胆碱:丙氨酸、氯化胆碱:色氨酸、氯化胆碱:酪氨酸、氯化胆碱:谷氨酸、氯化胆碱:谷胱甘肽、氯化胆碱:果糖、氯化胆碱:海藻糖、甜菜碱:异丙醇、甜菜碱:半胱氨酸、甜菜碱:丙氨酸、甜菜碱:赖氨酸、甜菜碱:谷氨酸、L-肉碱:赖氨酸、L-脯氨酸:赖氨酸、L-肉碱:葡萄糖:甘油。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述催化剂的制备方法为:重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a(+)-LXCAR接种于含有50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、200rpm振荡培养12h,再以体积浓度1%的接种量接种到新鲜的含有50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、200rpm培养至菌体浓度OD600为0.6~0.9后,向培养液中加入终浓度为0.1mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,置于30℃、200rpm下诱导培养10h。培养结束后,4℃、

10000rpm离心10min,收集菌体,用生理盐水洗涤菌体两次,收集湿菌体,即为重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a(+)-LXCAR湿菌体。