利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020103317733
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种检测并降解氨苄青霉素的生物传感器,其特征在于,包括氨苄青霉素适配体Aptamer标记的Ag‑TiO2纳米粒子、目标物氨苄青霉素AMP、HAP1、HAP2、限制性核酸内切酶IV、10×的缓冲液buffer及灭菌水;

所用的碱基序列为:

Aptamer碱基序列如SEQ No.1所示;具体为:5’‑ SH‑ TTTTTTTGCGGGCGGTTGTATAGCGGTGCTTATACAACC ‑ 3’;

HAP1碱基序列如SEQ No.2所示;具体为: 5’‑ GGTGCTTATAC AAAA XGTT GTATAAGCACCGC ‑3’;

HAP2碱基序列如SEQ No.3所示;具体为: 5’‑ ggtgcttatac aacct(dabcyl)txt (fam)gtataagcacc ‑3’;

所述的HAP1的5’端第十五个碱基后连接有四氢呋喃位点X;

所述的Aptamer的5’端连接有‑SH;

所述的HAP2的5’端第十六个碱基上连接有猝灭基团Dabcyl,5’端第十八个碱基后四氢呋喃位点X,5’端第十九个碱基上连接有荧光基团FAM。

2.权利要求1所述的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备Ag‑TiO2纳米颗粒溶液;

(2)Aptamer标记Ag‑TiO2纳米粒子;

(3)将标记的纳米DNA‑Ag‑TiO2溶液与目标物氨苄青霉素、HAP1、HAP2、限制性核酸内切酶IV、10×的缓冲液buffer及灭菌水混合;

(4)催化发夹自组装反应、荧光检测,AMP浓度检测;

(5)继续放置,AMP降解。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的Ag‑TiO2纳米颗粒溶液的制备步骤如下:A1. 将柠檬酸钠与AgNO3,80℃水浴下搅拌,待溶液从无色逐渐深至黑褐色时,将逐滴加+入HNO3使Ag的还原反应终止,随后逐滴加入钛酸异丙酯,搅拌;

A2. 将A1的溶液置于高压反应釜,130℃,反应,即得到Ag‑TiO2溶胶;烘箱烘干,研磨即可得到Ag掺杂的TiO2粉末;

A3. A2的粉末,融入超纯水中,搅拌均匀,即可得到纳米颗粒溶液。

4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)的Aptamer标记Ag‑TiO2纳米粒子,操作步骤如下:B1. 取(1)的纳米颗粒溶液,离心, SDS溶液分散;

B2. 加入Aptamer溶液,超声;

B3. 90 ℃ 孵育;向混合溶液中加入一定量Na2SO4,超声,再次孵育;该步骤重复三次,停止孵育,冷却至室温,纳米粒子的DNA修饰完成。

5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中加入顺序为:灭菌水与标记好纳米Ag‑TiO2粒子混合,其次将目标物、HAP1、HAP2、与缓冲液加入,最后加入核酸内切酶VI。

6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(4)催化发夹自组装反应温度为37℃,时间是2 h。

7.权利要求1所述的生物传感器在食品及水体中氨苄青霉素的检测上的应用。

8.权利要求1所述的生物传感器在食品及水体中氨苄青霉素的降解上的应用。

9.根据权利要求8所述的降解上的应用,其特征在于,过程为:氨苄青霉素被Ag‑TiO2光催化降解。