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专利号: 2019107524674
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测氨苄青霉素的生物传感器,其特征在于,包括底物探针标记的金纳米粒子及均相反应液;

所述的均相反应液包括:灭菌水、目标物、HAP1、HAP2、HAP3、HAP4、10×的缓冲液buffer、切刻内切酶Nb.BbcCI、ThT;

所述的底物探针是由Walker、Aptamer和Track形成,且Walker和Track均含‑SH;

所述的Walker序列如SEQ No.1所示;

所述的Aptamer序列如SEQ No.2所示;

所述的Track序列如SEQ No.3所示;

所述的HAP1序列如SEQ No.4所示;

所述的HAP2序列如SEQ No.5所示;

所述的HAP3序列如SEQ No.6所示;

所述的HAP4序列如SEQ No.7所示。

2.一种权利要求1所述的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备金纳米颗粒溶液;

(2)底物探针标记金纳米粒子;

(3)将标记的纳米金溶液与均相反应溶液混合;

(4)杂交连锁反应、荧光检测;

所述步骤(3)的均相反应液包括:灭菌水、目标物、HAP1、HAP2、HAP3、HAP4、10×的缓冲液buffer、切刻内切酶Nb.BbcCI、ThT。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)的金纳米颗粒溶液的制备步骤如下:

(1)取500μL 0.04g/ml HAuCl4加入200ml超纯水中,搅拌加热煮沸;

(2)搅拌下,快速加入3ml 1%的柠檬酸三钠溶液,溶液颜色由浅黄色变为酒红色,继续加热15min后,慢慢冷却至室温,得到金纳米颗粒溶液,至于4℃保存备用;

(3)使用紫外分光光度计,计算出金纳米颗粒溶液的浓度为0.3nM。

4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)的底物探针标记金纳米粒子,操作步骤如下:

(1)将Walker与Aptamer按照1:1的比例混合在一起,加入PBS缓冲液,室温下反应2 h;

(2)将上述反应好的含‑SH的Walkker和含‑SH的Track按照1:20的比例混合,形成底物探针;

(3)浓缩纳米金溶液至3 nM,移入1 mL玻璃瓶中,用锡箔纸封口;

(4)按照纳米金与底物探针的浓度比1:5000混合均匀,4 ℃下放置24 h;

(5)分多次缓慢加入50 μL PB缓冲液,搅拌10 min后,继续加入27 μL PBS缓冲液;4 ℃放置48 h;

(6)洗脱未标记上的DNA链,既得底物探针标记金纳米粒子。

5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(4)杂交连锁反应温度为

37℃,时间是2 h。

6.权利要求1所述的生物传感器在检测食品及水体中氨苄青霉素上的应用。

7.权利要求2所制备的生物传感器在检测食品及水体中氨苄青霉素上的应用。