1.一种虾夷扇贝裙边多糖,其特征在于,所述多糖的两条主链由(→4)β-GlcA(1→4)α-GlcNAc→)结构和(→4)β-GlcA(1→3)-GalNAc→)结构组成;所述多糖的硫酸基含量为
5.73%~5.95%,糖醛酸含量为11.96%~13.84%,重均分子量为13.58kDa;单糖组成的摩尔比为甘露糖:氨基葡萄糖:鼠李糖:葡萄糖醛酸:氨基半乳糖:葡萄糖:半乳糖:岩藻糖=
17.7:11.7:12.1:1.0:15.9:8.0:23.7:24.7。
2.一种如权利要求1所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,包括步骤:
S1、取虾夷扇贝裙边,真空冷冻干燥至含水重量≤5%,破碎成粉,得虾夷扇贝裙边干粉;向所述虾夷扇贝裙边干粉中加入水,再加入所述虾夷扇贝裙边干粉重量0.5%~1.5%的胰蛋白酶干粉,37~40℃水浴震荡酶解2~4h,加入所述虾夷扇贝裙边干粉重量1.0%~
1.5%的木瓜蛋白酶干粉,50~60℃水浴震荡酶解2~4h,得混合溶液;其中,所述虾夷扇贝裙边干粉和水的重量体积比为1:(3~5)g/ml;所述胰蛋白酶干粉的酶活≥250USP U/mg,所述木瓜蛋白酶干粉的酶活≥2000U/mg;
S2、将步骤S1所述混合溶液加热灭酶,冷却至室温,调节pH=7.0,离心取上清液;
S3、向步骤S2所述上清液中加入其体积10%~20%的D204型大孔树脂,35~39℃水浴搅拌吸附5~7h,将所述树脂装入色谱柱中,用去离子水洗至滤出液无颜色;
S4、用1.5mol/L NaCl溶液洗脱3~5倍柱体积,收集滤出液;
S5、向步骤S4所述滤出液中加入其体积3~4倍的无水乙醇,放置于4℃中静置24~36h,得悬浊液A;
S6、将步骤S5所述悬浊液A一次离心取沉淀,加入去离子水溶解所述沉淀,调节pH=
8.0,于50℃加热搅拌2h,静置冷却至室温后,再次离心取上清液;其中,所述沉淀和所述去离子水的重量体积比为1:(1~2)g/ml;
S7、向步骤S6所述上清液中加入步骤S1所述虾夷扇贝裙边干粉重量0.1%~0.3%的胰蛋白酶干粉,调节pH=8.0,于37~40℃加热搅拌4~6h,加热灭酶,静置冷却至室温,得酶解液;其中,所述胰蛋白酶干粉的酶活≥250USP U/mg;
S8、向步骤S7所述酶解液中加入亚硫酸氢钠,所述亚硫酸氢钠和所述酶解液的料液比为(0.2~2):100g/ml,调节pH至1.5~2.0,离心收集上清液;
S9、向步骤S8所述上清液中加入过氧化氢,所述过氧化氢和所述上清液的体积比(1~
2):100,调节pH=8.5,静置14~16h,调节pH=6.5,加入所述上清液体积3倍体积的无水乙醇,于4℃静置沉淀10~15h,得悬浊液B;
S10、将步骤S9所述悬浊液B离心收集沉淀,用去离子水A溶解所述沉淀,用3500Da截留分子量的透析袋在去离子水B中透析3天后,冻干透析袋内液体至含水重量≤5%,得到虾夷扇贝裙边多糖;其中,所述沉淀和所述去离子水A的重量体积比为1:(1~100)g/ml。
3.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,步骤S2所述加热灭酶具体为:将步骤S1所述混合液置于沸水浴中加热10min。
4.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,步骤S6所述一次离心的参数为:转速4000r/min,时间10min,温度4℃。
5.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,步骤S6所述再次离心的参数为:转速4000r/min,时间10min,温度4℃。
6.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,步骤S7所述加热灭酶的参数为:100℃加热10min。
7.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,步骤S10所述冻干的参数为:冷阱温度-45~-55℃,真空度<10Pa。
8.根据权利要求2所述虾夷扇贝裙边多糖的提取方法,其特征在于,包括步骤:
S1、取虾夷扇贝裙边,在冷阱温度-50℃、真空度1Pa条件下真空冷冻干燥至含水重量为
1%,打粉,得虾夷扇贝裙边干粉;向1000g所述虾夷扇贝裙边干粉中加入5L水,再加入5g的胰蛋白酶干粉,37℃水浴震荡酶解3h,加入15g木瓜蛋白酶干粉,50℃水浴震荡酶解4h,得混合溶液;其中,所述胰蛋白酶干粉的酶活≥250USP U/mg,所述木瓜蛋白酶的酶≥2000U/mg;
S2、将步骤S1所述混合溶液置于沸水浴加热10min灭酶,冷却至室温,使用NaOH调节pH=7.0,4℃、转速4000r/min离心10min,收集上清液;
S3、向步骤S2所述上清液中加入其体积1/10的D204型大孔树脂,37℃水浴搅拌吸附6h后将所述树脂装入色谱柱中,用去离子水洗至滤出液无颜色;
S4、用4倍柱体积的1.5mol/L NaCl洗脱,收集滤出液;
S5、向步骤S4所述滤出液中加入其4倍体积的无水乙醇,放置于4℃中静置24h,得悬浊液A;
S6、将步骤S5所述悬浊液A置于4℃、转速4000r/min离心10min,收集沉淀,用去离子水溶解所述沉淀,用6.0mol/L NaOH调节pH=8.0,于50℃加热搅拌2h,静置冷却至室温,转速
4000r/min离心10min,取上清液;其中,所述沉淀和所述去离子水的重量体积比为1:1g/mlS7、将步骤S6所述上清液加入步骤S1所述虾夷扇贝裙边干粉重量0.2%的胰蛋白酶干粉,用6.0mol/L NaOH调节pH=8.0,于40℃加热搅拌5h,升温至100℃加热10min,再静置冷却至室温,得酶解液;其中,所述胰蛋白酶干粉的酶活为≥250USP U/mg;
S8、向步骤S7所述酶解液中加入5g亚硫酸氢钠,用HCl调节pH至2.0,在4℃、转速8000r/min离心10min,收集上清液;其中,所述亚硫酸氢钠和所述酶解液的料液比为1:100g/ml;
S9、向步骤S8所述上清液加入过氧化氢,用NaOH调节pH=8.5,静置15h,用HCl调节pH=
6.5,加入所述上清液体积3倍的无水乙醇,于4℃沉淀12h,得悬浊液B;其中,所述过氧化氢和所述上清液的体积比为1:50;
S10、将步骤S9所述悬浊液B置于4℃、4000r/min离心10min,收集沉淀;用去离子水A溶解所述沉淀,用3500Da截留分子量的透析袋在10L去离子水B中透析72h,期间每24h换一次去离子水B,冻干透析袋内液体至含水重量为1%,得虾夷扇贝裙边多糖;其中,所述冻干的参数为:冷阱温度-50℃,真空度1Pa;所述沉淀和所述去离子水A的重量体积比为1:50g/ml,所述去离子水A和所述去离子水B的体积比为1:20。
9.一种虾夷扇贝裙边多糖在制备免疫刺激药物中的应用。
10.一种药物组合物,其特征在于,包含虾夷扇贝裙边多糖。