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专利号: 2018108030732
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种虾夷扇贝内脏多糖,其特征在于,所述多糖的主链为→6)Manp(1→3)Galp(1→,-SO4存在于Man(1→的C-4和/或→3Gal(1→的C-4位。

2.根据权利要求1所述的多糖,其特征在于,所述多糖主链的→3)Galp(1→的C-4位被Xly或Glc取代。

3.根据权利要求1或2所述的多糖,其特征在于,所述多糖的硫酸基含量为7%-18%,糖醛酸含量为1%-10%。

4.根据权利要求1或2所述的多糖,其特征在于,所述多糖的分子量为50kDa-1000kDa,优选为63kDa-630kDa。

5.根据权利要求1或2所述的多糖,其特征在于,所述多糖的糖残基结构至少包括Rhap(1→、→4)Arap(1→、→4)Fucp(1→、Fucp(1→、Xylp(1→、→4)Rhap(1→、Manp(1→、Glcp(1→、→

2,4)Arap(1→、→3)Fucp(1→、→4)Fucp(1→、→4)Galp(1→、Galp(1→、→3,4)Rhap(1→、→

4)Manp(1→、→3)Galp(1→、→6)Manp(1→、→6)Galp(1→和→3,4)Galp(1→中的5种以上,存在己糖-糖醛酸,己糖-己糖和脱氧己糖-己糖重复二糖片段中的一个或多个。

6.根据权利要求1或2所述的多糖,其特征在于,所述多糖的单糖组成包括鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。

7.权利要求1所述多糖的提取方法,其特征在于,所述提取方法包括:(1)将虾夷扇贝内脏干粉于无水乙醇和正己烷1:2体积比混合溶液中搅拌0.5-2小时,静置过夜,除去脂肪,将上层有机试剂去除并风干;

(2)向每10g风干的样品中加入5-10mL浓度为0.05mol/L的半胱氨酸-EDTA二钠溶液及

25-40mL浓度为0.05mol/L,pH=8的K2HPO4缓冲溶液,再向样品中加入相对于样品质量0.2-

1.0%(m/m)的胰蛋白酶干粉,所述胰蛋白酶干粉的酶活≥250N.F.U/mg,37℃水浴震荡酶解

4h之后加入相对于样品质量0.2-1.0%(m/m)的木瓜蛋白酶干粉,所述木瓜蛋白酶干粉的酶活≥2000U/mg,65℃水浴震荡酶解2-4h制得混合溶液;

(3)步骤(2)所述混合溶液冷却到室温,离心,转速4000r/min,时间10min,温度4℃,取上清液;

(4)向上清液中,对应1g步骤(2)风干的样品加入1.0-2.0mL3-13%的氯化十六烷基吡啶溶液,室温下放置24h后,离心,转速8000r/min,时间15min,温度20℃,取沉淀;

(5)每g沉淀溶解于1-2mL NaCl-乙醇混合溶液,该混合溶液为2.5-3.5mol/L NaCl和

90-100%乙醇以体积比100:15混合所得溶液,再加入2.5-4mL 90-100%乙醇溶液,4℃放置

8h以上,离心,转速6000-10000r/min,时间10-30min,取沉淀;

(6)每g沉淀用2-5mL 80%和95%乙醇洗1-4次后,用水溶解,使用1000-10000Da透析袋蒸馏水透析24小时以上;

(7)加入0.5-1.5%亚硫酸氢钠作保护剂,用HCl调节pH至2.0,在4℃离心7-20min,转速

8000-12000r/min脱除蛋白,将上清液冻干得到虾夷扇贝内脏粗糖;

(8)虾夷扇贝内脏粗糖加样于0.25M NaCl平衡过的DEAE-纤维素柱,依次用0.25-0.75M NaCl溶液洗脱1-4个柱体积,收集洗脱部分,冻干;

(9)将步骤(8)所述冻干样品采用Sephadex G-100凝胶柱进行分离,用0.1-0.2M NaCl作为洗脱液,收集得到虾夷扇贝内脏多糖。

8.根据权利要求7所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中的虾夷扇贝内脏包括虾夷扇贝的消化道,消化腺,性腺,肾和循环系统中的一种或多种。

9.权利要求1-6任一所述多糖在制备抗凝血药物中的应用。

10.一种药物组合物,其特征在于,包含权利要求1-6任一所述多糖。