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专利号: 2020100835618
申请人: 中南林业科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.高产红曲色素的红曲霉菌株,其特征在于:其分类命名为紫色红曲霉菌(Monascus purpureus),菌株号为CSU‑M630,保藏编号为CCTCC NO:M 2019596,保藏日期为2019年8月1日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心。

2.如权利要求1所述的高产红曲色素的红曲霉菌株,其特征在于所述菌株采用如下方法获得:将亲本菌株LQ‑6CCTCC NO:M 2018600利用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,诱变条件为:产生等离子体的载气为99.999%的高纯氦气,气量为10.00SLM,入射功率120W,工作距离2mm,处理时间为150s,得诱变后的菌液;之后从诱变后的菌液中筛选出红曲色素产量最大的诱变菌株,即得如权利要求1所述的高产红曲色素的红曲霉菌株。

3.如权利要求2所述的高产红曲色素的红曲霉菌株,其特征在于,所述诱变菌株的筛选方法如下:

1)将诱变后的菌液均匀涂布于PDA平板中,于30℃中避光倒置培养7d,淘汰菌落明显偏小、生长速度慢、菌丝稀薄的菌落,筛选出菌落形态与原菌株有明显差异、生长较快或特别红的单菌落;

2)将步骤1)筛选出的单菌落接种至PDA平板培养基中,并对应编号,于30℃避光倒置培养7d,得到培养好的突变株;

3)将步骤2)获得的突变株接种至PDB培养基中,于30℃、150r/min黑暗振荡培养7d,得突变株孢子悬液;将突变株孢子悬液接入发酵液中,于30℃、150r/min黑暗振荡培养7d后测定红曲胞外色素,筛选出产量最大的菌株。

4.一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于包括如下步骤:

1)制备红曲霉菌孢子悬浮液:将权利要求1所述的胞外色素红高产曲霉菌株制成浓度6

为1.0×10孢子/mL的红曲霉菌孢子悬浮液;

2)包埋固定化:将红曲霉菌孢子悬浮液与已灭菌的质量浓度为3%的海藻酸钠溶液以质量比1:7~10g/g的比例混合均匀制成海藻酸钠‑孢子悬浮液,待气泡消失后逐滴滴入至已灭菌的质量浓度为8%的氯化钙溶液中,制成直径为2~3mm的固定化颗粒,之后继续让固定化颗粒在氯化钙溶液中于2~8℃条件下浸泡2~6h,然后滤出固定化颗粒,用生理盐水洗三次,之后将固定化颗粒浸泡在生理盐水中于2~8℃保存备用;

3)多批次连续发酵:将包埋固定化后的红曲霉菌孢子悬浮液进行发酵罐分批发酵;

4)分离纯化:将发酵后的发酵液经过大孔吸附树脂将红曲色素分离纯化。

5.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(1)制备红曲霉菌孢子悬浮液具体为,将权利要求1所述的胞外色素红高产曲霉菌株用马铃薯葡萄糖培养基在30℃条件下培养7d,之后用4层无菌医用纱布过滤发酵液,0.85%生理盐水6

等体积洗涤两次,0.85%生理盐水调整至孢子数1.0×10个/mL。

6.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(2)包埋固定化具体为,将红曲霉菌孢子悬浮液与已灭菌的质量浓度为3%的海藻酸钠溶液以质量比1:9g/g的比例混合均匀制成海藻酸钠‑孢子悬浮液,待气泡消失后逐滴滴入至已灭菌的质量浓度为8%的氯化钙溶液中,制成直径为2~3mm的固定化颗粒,之后继续让固定化颗粒在氯化钙溶液中于4℃条件下浸泡4h,然后滤出固定化颗粒,用生理盐水洗三次,之后将固定化颗粒浸泡在生理盐水中于4℃保存备用。

7.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(3)多批次连续发酵中,按照接种量为8%~12%的孢子悬浮液制备成固定化颗粒接种。

8.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(3)多批次连续发酵中,发酵罐分批发酵中发酵液培养基的配方如下:葡萄糖80g/L;酵母膏

2.5g/L;麦芽浸膏2.5g/L;蛋白胨2.5g/L;CaCl2·2H2O 0.1g/L;MgSO4·7H2O 0.5g/L;

FeSO4·7H2O 0.01g/L;MnSO4·7H2O 0.03g/L;KH2PO4 0.01g/L;ZnSO4·7H2O 80g/L。

9.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(4)分离纯化中,采用体积浓度为95%的乙醇水溶液作为洗脱剂。

10.如权利要求4所述的一种生产红曲霉菌胞外色素的方法,其特征在于,所述步骤(4)分离纯化中,大孔吸附树脂的粒度0.40~1.25mm为97.20%,含水量为51.26%,湿视密度为

0.69g/mL,湿真密度为1.06g/mL,质量全交换容量为5.12mmol/g,渗磨圆球率为98.25%。