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专利号: 2019113974090
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-10-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测甲基转移酶的单个量子点纳米传感器,其特征在于,所述纳米传感器至少包括:双链DNA探针,量子点和标记有荧光分子的三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸;

所述双链DNA探针设计有CpG甲基转移酶的识别位点;

所述双链DNA探针5’末端上设计有生物素;3’末端设计有PO4;

所述双链DNA探针的碱基序列如下:

m

5’‑biotin‑GAC TAC TGT GCG  CTT CAT GAT C‑PO4‑3’(SEQ ID NO.1);

m m

5’‑biotin‑GAT CAT GAA GCG  CAC AGT AGT C‑PO4‑3’(SEQ ID NO.2);

m

其中,C为甲基胞嘧啶。

2.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征在于,所述量子点为605QDs,所述量子点表面包被有链亲和素。

3.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征在于,所述荧光分子为花菁5。

4.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征在于,所述纳米传感器还包括S‑腺苷基甲硫氨酸、GlaI内切酶和末端转移酶。

5.权利要求1‑4任一项所述纳米传感器在检测DNA甲基转移酶中的应用;所述DNA甲基转移酶为CpG甲基转移酶,不以疾病的诊断和治疗目的。

6.一种利用权利要求1所述的检测甲基转移酶的单个量子点纳米传感器检测CpG甲基转移酶的方法,其特征在于,其不以疾病诊断和治疗为目的,所述方法包括:(1)将待测样品和双链DNA探针进行甲基化反应得甲基化产物;

(2)将甲基化产物加入GlaI内切酶进行酶切反应;

(3)将切割产物与末端转移酶,标记有荧光分子的三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸混合得反应产物;

(4)将反应产物与量子点混合,得量子点/探针/Cy5的结构。

7.如权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中,加入参与甲基转移反应的辅酶因子即S‑腺苷基甲硫氨酸以促进甲基化反应的进行;所述甲基化反应具体条件为在37℃中反应30‑150min;

所述步骤(2)中,酶切反应具体条件为:30℃下反应30‑150min,随后在80℃中反应20分钟终止该反应;

所述步骤(3)中,反应条件具体为在37℃中反应30‑180min,随后在80℃中反应20分钟使反应停止;

所述步骤(4)中,反应条件具体为在室温下反应15‑30分钟。

8.如权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中,加入参与甲基转移反应的辅酶因子即S‑腺苷基甲硫氨酸以促进甲基化反应的进行;所述甲基化反应具体条件为在37℃中反应120min;

所述步骤(2)中,酶切反应具体条件为:30℃下反应120min,随后在80℃中反应20分钟终止该反应;

所述步骤(3)中,反应条件具体为在37℃中反应120min,随后在80℃中反应20分钟使反应停止;

所述步骤(4)中,反应条件具体为在室温下反应20分钟。

9.如权利要求6‑8任一项所述的检测方法,其特征在于,还包括采用荧光成像系统测定荧光信号,从而实现对CpG甲基转移酶的定量检测;

所述测定荧光信号方法为:在405nm处激发QD并分别收集609.8nm和670nm处的信号。

10.权利要求1‑4任一项所述纳米传感器和/或权利要求6‑9任一项所述检测方法在DNA甲基转移酶活性检测和/或筛选DNA甲基转移酶药物中的应用。

11.如权利要求10所述的应用,其特征在于,所述DNA甲基转移酶药物包括DNA甲基转移酶促进剂和DNA甲基转移酶药物抑制剂。