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专利号: 2021115812401
申请人: 台州学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于纳米孔道的免标记甲基转移酶的检测方法,其特征在于,所述纳米孔道是基于核孔膜表面通过不对称的径迹刻蚀法制备得到,所述纳米孔道的大端孔径为1.14μm,小端孔径为85nm,所述纳米孔道内壁修饰聚乙烯亚胺和锆离子;

所述检测方法是利用免标记甲基转移酶传感器进行检测,所述免标记甲基转移酶传感器的使用方法包括:当存在Dam甲基转移酶的情况下,发夹序列HD的相应识别位点被甲基化,并被DpnI核酸内切酶特异性切割,释放DNA片段,触发催化发夹组装和杂交链式反应,生

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成的产物吸附在Zr 包覆的纳米孔上,并输出离子电流整流信号,实现了对Dam甲基转移酶的选择性检测;

所述DNA片段的序列如下:

HD:GTGAATAGAGTATGATCGAGTGTTCTCTATCATTATCTTCTCGATCATACTCTATTC AC;

H1:TCTCTATCATTATCTTGCTTCATCTTCATCTCAAGATAATGATAGAGAACACTC;

H2:CTTGCTTCATCTTCATCTCCGACACTCTCTCTATCATTATCTTGAGATGAAGATGA AGCAAGATAATG;

H3:GAGTGTCGGAGATGAAGATGAAGGCATTTCCGTGCTTCATCTTCA;

H4:CTTCATCTTCATCTACACTCTGAAGATGAAGCACGGAAATGC;

所述甲基化包括将发夹序列HD、腺苷甲硫氨酸、DpnI核酸内切酶,Cutsmart缓冲液和Dam甲基转移酶在37℃下孵育2小时,然后向Dam/DpnI处理过的溶液中添加发夹DNAH1‑H4,在37℃下进行1h的均相CHA‑HCR反应。