1.一种基于单量子点的纳米传感器,其特征是,包括发夹探针、AP探针、捕获探针、改性单量子点、APE1酶、改性脱氧核糖核苷三磷酸;
所述发夹探针为茎-环结构的单链DNA,茎结构的一条互补链修饰次黄嘌呤,茎结构中次黄嘌呤至末端序列为能够与AP探针配对杂交的触发探针;
所述AP探针为含有AP位点的单链DNA,所述AP位点位于能够与触发探针互补的AP探针的序列中,AP位点至AP探针末端的序列为能够与捕获探针配对杂交的引物;
所述捕获探针为一个末端修饰有生物素的单链DNA,捕获探针长度高于引物的长度,所述捕获探针分为两部分序列,一部分序列为能够与引物配对杂交的序列,另一部分序列中含有若干能够与改性脱氧核糖核苷三磷酸的位点,生物素修饰在另一部分序列的末端;
所述改性脱氧核糖核苷三磷酸为修饰有Cy5的一种脱氧核糖核苷三磷酸;
所述改性单量子点为表面修饰链霉亲和素的单量子点。
2.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征是,所述发夹探针为3'端突出的茎-环结构的单链DNA,次黄嘌呤位于茎结构的3'端的互补链上,所述触发探针为次黄嘌呤至3'端的序列。
3.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征是,所述AP探针的长度大于触发探针的长度;
或,所述引物为AP位点至AP探针5'端的序列。
4.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征是,所述捕获探针的5'端修饰有生物素。
5.如权利要求1所述的纳米传感器,其特征是,发夹探针5'至3'的序列为CAC GAT GAA TCC TAG ACT ATT TTT ATA GTC TAG GAT TCI TCG TGA CAA TAC AAC;
AP探针5'至3'的序列为CGC TGG AGC TGA GTT GTT GTA TXG TCA CGA;
捕获探针5'至3'的序列为AAA TGA CAT CGA CTG ACG TAC CTC A TAC AAC AACTCA GCT CCA GCG。
6.一种人烷基糖基化酶的检测试剂盒,其特征是,包括权利要求1~5任一所述的纳米传感器、缓冲溶液、DNA聚合酶;
优选的,DNA聚合酶为Klenow片段聚合酶。
7.基于单量子点的纳米传感器检测人烷基糖基化酶的方法,其特征是,提供权利要求1~5任一所述的纳米传感器或权利要求6所述的检测试剂盒,hAAG引发发夹探针裂解产生触发探针,触发探针与AP探针杂交,在APE1酶的作用产生裂解释放出触发探针,并获得引物,释放的触发探针继续与AP探针杂交APE1的辅助下形成循环裂解,从而获得大量引物,获得引物与捕获探针杂交后,通过聚合将改性脱氧核糖核苷三磷酸聚合至双链DNA中,双链DNA通过生物素与单量子点的链霉亲和素的结合,使双链DNA自组装至单量子点的表面,然后经过激发后使Cy5产生荧光共振能量转移,并进行荧光检测。
8.如权利要求7所述的方法,其特征是,其步骤为:
(1)将待测样品、发夹探针、APE1酶加入至1×NEBuffer 4中,在人体温度下进行反应;
(2)向步骤(1)反应后的溶液中添加AP探针和APE1酶,在人体温度下进行反应;
(3)将步骤(2)反应后的产物、捕获探针、改性脱氧核糖核苷三磷酸、与改性脱氧核糖核苷三磷酸不同另外三种脱氧核糖核苷三磷酸、Klenow片段聚合酶添加至1×NEBuffer2中,在人体温度下进行反应;
(4)将步骤(3)反应后的产物、改性单量子点加入至含有氯化镁、Tris-HCl和硫酸铵的溶液中进行孵育获得QD-dsDNA-Cy5纳米结构;
(5)将获得的QD-dsDNA-Cy5纳米结构进行荧光检测。
9.如权利要求7所述的方法,其特征是,荧光检测条件为:激发波长为405nm,激发和发射狭缝均为5nm。
10.如权利要求7所述的方法,其特征是,将发夹探针放入孵育缓冲溶液中,升温至90~
100℃进行孵育,然后冷却至室温形成发夹结构;所述孵育缓冲溶液中含有氯化镁和Tris-HCl。