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专利号: 2019112822476
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白,其特征在于,所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白绝对量为1mg时,变性温度为87℃。

3.根据权利要求1所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白,其特征在于,所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的活性为0.4370iron/subunit/s。

4.一种编码如权利要求1所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的基因mGF1,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,包括步骤:S1、获得编码如权利要求1所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的核苷酸序列,所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

S2、将所述核苷酸序列插入pET载体中,获得重组质粒;

S3、将所述重组质粒转化大肠杆菌BL21,进行表达培养;

S4、提取所述大肠杆菌BL21表达的具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白。

6.根据权利要求5所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,步骤S3所述表达培养的条件为:在含有重组质粒的大肠杆菌BL21的培养基中加入终浓度为0.6mM的异丙基硫代半乳糖苷,28℃摇菌培养6h。

7.根据权利要求5所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,步骤S4所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的提取过程为:超声破碎含有重组质粒的大肠杆菌BL21,离心取上清液,将所述上清液依次经过硫酸铵沉淀、透析除盐、弱阴离子交换层析,得所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白。

8.根据权利要求7所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,所述弱阴离子交换层析为DEAE纤维素柱层析。

9.根据权利要求7所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,所述离心的转速为10000rpm。

10.根据权利要求7所述具有高热稳定性的牡蛎铁蛋白的制备方法,其特征在于,所述硫酸铵沉淀,4℃、硫酸铵的饱和度为80%。