1.一种硫酸软骨素酶AC突变体,其特征在于:该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种权利要求1所述的硫酸软骨素酶AC突变体的制备方法,包括步骤:原始基团表达载体构建:以SEQ ID NO:1所示的野生型硫酸软骨素酶AC的氨基酸序列对应的DNA合成序列为模板设计引物进行PCR扩增,并引入NdeI和BamHI限制性酶切点,然后分别连接到pET15b载体上进行基因重组构建得到野生型硫酸软骨素酶AC重组载体,命名为pET‑15b‑AachAC;
突变体构建及重组:以所述野生型硫酸软骨素酶AC重组载体pET‑15b‑AachAC为模板,将所述野生型硫酸软骨素酶AC的氨基酸突变位点第170位突变为甘氨酸,并进行PCR扩增获得PCR产物,然后用FD DpnI内切酶进行消化,制得硫酸软骨素酶AC突变体重组载体,命名为pET‑15b‑AachAC‑170G;
突变体表达及纯化:将所述硫酸软骨素酶AC突变体重组载体pET‑15b‑AachAC‑170G用化学法转化至宿主菌E.coli DH5α或E.coli BL21(DE3)中,先采用TB培养基进行发酵培养,再采用IPTG进行诱导处理,然后依次进行破碎处理和纯化处理,收集得到所述硫酸软骨素酶AC突变体的纯酶液。
3.根据权利要求2所述的硫酸软骨素酶AC突变体的制备方法,其特征在于:所述突变体构建及重组的步骤包括以所述野生型硫酸软骨素酶AC重组载体pET‑15b‑AachAC为模板,将所述突变位点第170位的DNA序列设计到上游引物和下游引物中,进行反向PCR扩增获得所述PCR产物,其中,所述上游引物具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列,所述下游引物具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。