1.一种可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、构建可逆自组装蛋白rHuHF原核表达BL21‑pET3a‑rHuHF工程菌株，包括如下步骤：

其中所述可逆自组装蛋白rHuHF为人源重链铁蛋白rHuHF；所述可逆自组装蛋白的mRNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述可逆自组装蛋白的氨基酸序列为如SEQ ID NO.2所示，共183个氨基酸组成，分子量为504kDa；

S11、人源重链铁蛋白RNA提取：以人口腔内壁表皮细胞为原料，提取mRNA；

S12、人源重链铁蛋白rHuHF基因构建和扩增：以步骤S11所述mRNA为模板，反转录成cDNA；以所述cDNA为模板，SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所述序列为引物，扩增rHuHF DNA；

S13、表达质粒pET3a的构建和扩增：使用Nde I、EcoR I分别对质粒pET3a和rHuHF DNA进行双酶切，使用T4 DNA Ligase将酶切后的pET3a和酶切后的rHuHF DNA片段相连接，得到重组质粒pET3a‑rHuHF；将所述重组质粒pET3a‑rHuHF热激转化到克隆菌株JM109中；

S14、原核表达系统BL21‑pET3a‑rHuHF的构建：提取所述重组质粒pET3a‑rHuHF，转化到工程菌株BL21(DE3)中，得工程菌株BL21‑pET3a‑rHuHF，制备成工程菌株BL21‑pET3a‑rHuHF甘油菌保；

S2、培养种子液：将基因工程菌株BL21‑pET3a‑rHuHF甘油菌保按3％～5％的接种体积接种于含有氨苄青霉素50μg/mL的LB液体培养基中，36～37℃、150～250rpm震荡培养5～

10h，得种子液；

S3、发酵罐灭菌：将装有LB液体培养基的发酵罐121℃灭菌15～30min，维持发酵罐内灭菌后LB培养基的温度为30～42℃；

S4、发酵罐培养及诱导表达：将步骤S2所述种子液按培养基体积的1‰～5‰接种于步骤S3所述灭菌后LB液体培养基中，并加入AMP使其终浓度为0.04～0.06mg/ml，搅拌转速150～250rpm、通气量0.8～1.6L/min，培养温度36～37℃，培养至菌液OD600为0.6～1.0，加入IPTG至终浓度为0.1～1mM，搅拌转速150～250rpm、通气量0.8～1.6L/min、温度36～37℃，培养8～10h，得发酵菌液A；

S5、提取粗蛋白：收集步骤S4所述发酵菌液A，8000～15000rpm、0～4℃离心2～10min，取菌体沉淀；将所述菌体沉淀加入其1～10倍重量、pH7.0～8.0、20～50mM Tris‑HCl重悬得菌液B，用300～400W功率超声所述菌液B，每超声2～3s停止3～5s，总时长15～20min，得菌体破碎液；将所述菌体破碎液8000～10000rpm、0～4℃离心5～10min，取上清液A，置于60～

70℃热处理10～20min，8000～10000rpm、0～4℃离心5～10min，取上清液B；将所述上清液B加入60％饱和度的硫酸铵，0～4℃、240～480rpm搅拌20～40min、静置6～10h，8000～

10000rpm、0～4℃离心5～10min，取沉淀；使用1～5倍沉淀重量的pH7～8、20～50mM Tris‑HCl重悬所述沉淀，得溶液A；使用分子量3500Da的透析袋对所述溶液A进行透析，得rHuHF粗蛋白溶液A；使用0.22～0.45μm的水系滤膜过滤rHuHF粗蛋白溶液A，得rHuHF粗蛋白溶液B；

S6、分离纯化：将步骤S5所述rHuHF粗蛋白溶液B使用柱体积24mL的DEAE弱阴离子交换层析柱进行纯化；以pH8.0、50mM Tris‑HCl为流动相溶液洗脱不与DEAE柱子吸附的杂蛋白，流动相流速1～2mL/min；用含1M NaCl的pH8.0、50mM Tris‑HCl进行梯度洗脱吸附在DEAE柱子上的rHuHF蛋白，紫外检测蛋白质洗脱峰，检测波长为260nm和280nm；收集180mL时出现的洗脱峰，即为rHuHF蛋白峰溶液，获得电泳纯的rHuHF蛋白溶液；使用柱体积84mL的Superdex200分子筛层析纯化所述电泳纯的rHuHF蛋白溶液，以pH8.0、50mM Tris‑HCl为缓冲液平衡Superdex 200分子筛并洗脱，所述缓冲液流速0.2～1mL/min，紫外检测蛋白质洗脱峰，检测波长为260nm和280nm，收集保留体积约为41.18mL处的洗脱峰，获得单体rHuHF蛋白溶液，超滤浓缩脱盐，真空冷冻干燥，获得固体蛋白粉末即为可逆自组装蛋白rHuHF。

2.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S3所述LB液体培养基的体积为所述发酵罐体积的50％～70％。

3.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S5所述菌液B置于冰浴中进行超声，超声探头插入菌液B液面以下总高度1/3处。

4.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S5所述透析具体为：使用分子量3500Da的透析袋、以100倍体积、pH7～8、20～50mM Tris‑HCl对所述溶液A进行透析，每6h换一次透析液，透析3次，除去硫酸铵得rHuHF粗蛋白溶液A。

5.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S6所述真空冷冻干燥的时间‑温度程序设置如下，第一段：‑60℃～‑50℃预冻3～5小时，第二段：‑45℃～‑40℃冷冻1～3小时，第三段：‑30℃～‑25℃冷冻1～2小时，第四段：‑10℃～‑5℃冷冻1～

2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥1～2小时；在第二段抽真空，所述第二段至第七段的真空度15～25Pa；真空泵启动温度为‑60℃～‑50℃，隔板温度设定为‑30℃～‑20℃。

6.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S6所述超滤浓缩脱盐具体为：使用分子量10kDa的超滤离心管3000～5000rpm、5～10min超滤离心所述rHuHF溶液；向超滤离心管的内层套管中补入纯净水至离心前的体积，3000～5000rpm、超滤离心5～10min；再次向超滤离心管的内层套管中补入纯净水至离心前的体积；3000～

5000rpm、超滤离心5～10min，得脱盐的rHuHF蛋白溶液。

7.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S3所述发酵罐灭菌具体为：将装有3.5L LB液体培养基的5L发酵罐进行121℃高温灭菌30min，控制LB液体培养基温度维持37℃。

8.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S4所述发酵罐发酵及诱导表达具体为将步骤S2所述种子液以17.5mL的接种体积接种入步骤S3所述发酵罐的LB液体培养液中，并加入AMP使其终浓度为0.05mg/ml，控制搅拌转速200rpm、空气通量1.6L/min、温度37℃进行发酵培养，发酵过程中每隔一小时取样检测菌液OD值及菌液pH变化，当培养到罐内菌液浓度OD600值为1时，加入IPTG溶液至终浓度0.1mM，200rpm、通气量

1.6L/min、温度37℃，继续培养9h，得发酵菌液A；其中，所述发酵罐为5L发酵罐，装有3.5L LB液体培养基。

9.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S5所述提取粗蛋白具体为：收集步骤S4所述的发酵菌液A，以8000rpm 4℃条件离心10min，取菌体沉淀，将所述菌体沉淀用相等重量的、50mM pH7.5Tris‑HCl重悬，得菌液B；将所述菌液B置于冰浴中进行超声细胞破碎，超声探头插入菌液B液面以下总高度1/3处，超声功率300W，每超声3s停4s，总时长15min，得菌体破碎液；将所述菌体破碎液以10000rpm 4℃条件离心10min，取上清液A，60℃水浴加热10min，以10000rpm 4℃离心10min，取上清液B；向所述的上清液B中加60％饱和度的(NH4)2SO4，于4℃、300rpm搅拌40min，然后4℃静置6h，以10000rpm 4℃离心

10min，取沉淀；用所述沉淀相等重量的50mM pH7.5 Tris‑HCl重悬所述沉淀，得溶液A；采用截留分子量3500Da的透析袋，以100倍所述溶液A体积的50mM pH7.5 Tris‑HCl为缓冲液对溶液A进行透析，每6h换一次缓冲液，重复3次，得rHuHF粗蛋白溶液A，使用一次性注射器外接0.45μm滤膜过滤所述rHuHF粗蛋白溶液A，得rHuHF粗蛋白溶液B。

10.根据权利要求1所述可逆自组装蛋白的高效制备方法，其特征在于，步骤S6所述分离纯化具体为：将步骤S5所述rHuHF粗蛋白溶液B进行DEAE弱阴离子交换层析‑分子筛层析，柱体积为24mL，以50mM pH8.0 Tris‑HCl为流动相A溶液洗脱不与柱子吸附的杂蛋白，流动相流速2mL/min，以含1M NaCl的50mM pH 8.0 Tris‑HCl的流动相B进行梯度洗脱吸附在DEAE柱子上的蛋白，上样后紫外检测蛋白质洗脱峰，检测波长280nm，收集180mL时出现的洗脱峰，即为rHuHF蛋白峰溶液；将所述电泳纯rHuHF溶液进行Superdex 200分子筛层析，所用柱子体积为84mL，以50mM、pH8.0Tris‑HCl为缓冲液平衡分子筛并洗脱，缓冲液流速1mL/min，紫外检测蛋白质洗脱峰，检测波长为260nm和280nm，收集保留体积约为41.18mL处的洗脱峰，为单体rHuHF蛋白溶液；将所述单体rHuHF蛋白溶液采用截留分子量10kDa的超滤离心管4000rpm、10min进行超滤，向超滤管内层套管补入纯净水至离心前的体积；4000rpm超滤离心10min；向超滤管内层套管再次补入纯净水至离心前的体积；4000rpm、超滤离心10min得到脱盐rHuHF溶液；于真空冷冻干燥机中冻干，得到固体粉末即为可逆自组装蛋白rHuHF；

所述冷冻干燥方法采用梯度变温方式进行，冷冻干燥的时间‑温度程序设置如下，第一段：‑

60℃预冻3小时，第二段：‑45℃冷冻3小时，第三段：‑30℃冷冻2小时，第四段：‑10℃冷冻2小时，第五段：5℃干燥2小时，第六段：20℃干燥2小时，第七段：25℃干燥2小时，在第二段时间进行抽真空，所述第二阶段至第七阶段的真空度在20Pa，真空泵启动温度为‑60℃，隔板温度设定为‑30℃。