1.一种贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括蛋白酶解、芳香族氨基酸专一吸附剂制备、芳香族氨基酸脱除,所述芳香族氨基酸专一吸附剂为分子印迹聚合物;
所述蛋白酶解包括如下步骤:
(1)取新鲜贝肉洗净,按照贝肉与水的质量比1:5-1:10加水匀浆,得到浆料;
(2)向步骤(1)得到的浆料中加入内切蛋白酶,酶解条件为:酶添加量为占浆料总质量
1000-3000U/g,pH 5-8,酶解温度 30-50℃,酶解时间 5-10 h,然后煮沸5-15min灭酶,得到酶解液;
(3)向步骤(2)获得的酶解液中,加入外切蛋白酶,酶解条件为:酶添加量为占浆料总质量1000-2000U/g,pH 5-8、酶解温度 30-55℃,酶解时间 8-12 h,然后煮沸5-15min灭酶,
3000-8000r/min离心5-30min,收集上清液,得到贝类寡肽溶液;
所述分子印迹聚合物的制备方法包括如下步骤:
(1)0.5代树枝状聚酰胺-胺制备:以乙二胺为核,进行Michael加成反应,制备0.5代树枝状聚酰胺-胺;
(2)1代树枝状聚酰胺-胺制备:以0.5代树枝状聚酰胺-胺和乙二胺进行酰胺化缩合反应制备1代树枝状聚酰胺-胺;
(3)2代树枝状聚酰胺-胺制备:对步骤(2)获得的1代树枝状聚酰胺-胺重复进行步骤(1)中的Michael加成和步骤(2)中的酰胺化缩合反应,制备2代树枝状聚酰胺-胺;
(4)端双键树枝状聚合物的制备: 由2代树枝状聚酰胺-胺和丙烯酰氯进行胺解反应即得到端双键树枝状聚酰胺-胺;(5)分子印迹聚合物合成:以芳香族氨基酸作为模板,与步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺合成,即得分子印迹聚合物;
所述芳香族氨基酸脱除包括如下步骤:
向所述蛋白酶解后的产物中添加其1-5wt%分子印迹聚合物,10-20℃搅拌30-100min,
4000-10000r/min离心5-30min,收集上清液,获得高F值寡肽溶液。
2.根据权利要求1所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述分子印迹聚合物的制备方法中步骤(1)的Michael加成反应,其工作条件为:将9份乙二胺和32 份甲醇加入到带有磁力搅拌子、回流冷凝管和温度计的三口烧瓶中,15-30℃ 通氮气5-20 min除氧,搅拌条件下,滴加103.2 份丙烯酸甲酯,反应10-30 h,在20-35 ℃,100-200 Pa的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和过量的丙烯酸甲酯,得0.5代树枝状聚酰胺-胺;
所述分子印迹聚合物的制备方法中步骤(2)的酰胺化缩合反应,其工作条件为:将20.2 份 步骤(1)中获得的0.5代树枝状聚酰胺-胺和64 份甲醇混合,15-30℃ 搅拌条件下,滴加
72 份乙二胺,反应10-30 h,在45-75℃,100-300 Pa 的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和乙二胺,得到1.0代树枝状聚酰胺-胺;
所述分子印迹聚合物的制备方法中步骤(4)的工作条件为:称取1份2代树枝状聚酰胺-胺和8-16份丙烯酰氯,用二氯甲烷溶解,通氮气保护,避光2-4℃反应1-3h,得到具有沉淀物的溶液,低温过滤,得到端双键树枝状聚酰胺-胺产物;
所述分子印迹聚合物的制备方法中步骤(5)的工作条件为:称取1份芳香族氨基酸作为模板分子,加入5-10份乙醇,滴加50-200 µL 37wt%的盐酸使模板分子全部溶解;加入3-8 mmo1步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺,溶解,于冰水浴中作用5-10h后加入功能单体与引发剂,超声混合均匀,充氮气3-15min,然后置于冰水浴中进行紫外光引发聚合;聚合完成后将所得产物粉碎、研磨,用甲醇和乙酸除去模板分子,真空干燥后备用;所述功能单体为甲基丙烯酸,所述引发剂为偶氮二异丁腈。
3.根据权利要求1或2所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述芳香族氨基酸为酪氨酸、色氨酸或苯丙氨酸。
4.根据权利要求1所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述贝类为栉孔扇贝、虾夷扇贝或海湾扇贝。
5.根据权利要求1所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述高F值寡肽的F值为50以上。