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专利号: 2019100827021
申请人: 中南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)水生动物组织中百菌清的提取

①取水生动物组织样品和蛋白酶置于离心管一中,超声,涡旋,静置;

②萃取:在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂,涡旋,加入CH3COONa和无水MgSO4,涡旋,振荡,离心,取出萃取液并冷冻;

③取离心管二加入N-丙基乙二胺、C18、无水MgSO4,然后加入步骤②中经冷冻的萃取液,涡旋,离心,然后取上清液,氮吹近干后,加入稳定剂,用正己烷定容,过有机滤膜,得到待测样品;

(2)检测

①绘制标准曲线;

②将步骤(1)③得到的待测样品置于进样瓶中,用GC-ECD检测。

2.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,所述水生动物组织为鱼肉,虾肉,蟹肉中的任意一种;

优选地,所述水生动物组织为鱼肉。

3.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(1)①中的pH为7-8,温度为40-50℃,超声功率为200-400W;进一步地,超声时间为

2min-2h;进一步地,超声时间为10min-40min;进一步地,超声时间为30min;

进一步地,步骤(1)①中的pH为7.5,温度为45℃,超声功率为300W。

4.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(1)②、(1)③中离心管为聚丙烯离心管;

进一步地,步骤(1)②中冷冻时间为1-8h;进一步地,步骤(1)②中冷冻时间为3-6h;进一步地,步骤(1)②中冷冻时间为4h;

进一步地,步骤(1)②中所述萃取溶剂为100%甲醇或者酸性乙腈溶液;

进一步地,所述酸性乙腈溶液为甲酸/乙腈混合溶液或者乙酸/乙腈混合溶液;

进一步地,所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为0.5-2%的乙腈溶液;

所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为0.5-2%的乙腈溶液;

进一步地,所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为1%的乙腈溶液;

所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为1%的乙腈溶液;

进一步地,所述酸性乙腈溶液为乙酸/乙腈混合溶液。

5.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(1)②中萃取条件为:萃取温度70℃,预热时间5min,稳定萃取时间5min;

进一步地,萃取步骤循环1-5次;进一步地,此萃取步骤循环3次。

6.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1:(0.2-10);

进一步地,步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1:4;

进一步地,无水MgSO4需进行预处理,所述预处理步骤为:在380-520℃下灼烧2-8h,冷却后装入磨口玻璃瓶中,置于干燥器中保存。

7.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(1)③中所述稳定剂为甲酸。

8.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,步骤(2)①绘制标准曲线的方法为:配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、

400ppb、500ppb的标准溶液,用GC-ECD检测,绘制标准曲线;

进一步地,所述步骤(2)②中,GC-ECD检测时,检测仪器为Agilent 7890A型气相色谱仪,检测器为μ-ECD,

色谱柱类型为HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm),氮气流量为1mL/min,

进样量为1μL,

进样口温度为250℃。

9.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,所述水生动物组织中百菌清经超声蛋白质酶解后,其加标回收率为70~110%,RSD小于10%,检出限为0.012μg/L。

10.根据权利要求1-9任一所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)水生动物组织中百菌清的提取

①5.0g鱼肉样品和10mL蛋白酶,置于聚丙烯离心管一中,调节pH为7.5,300W超声,涡旋,静置;

②萃取:在步骤①静置完毕的聚丙烯离心管一中加入10mL醋酸体积分数为1%的乙腈溶液,涡旋,加入CH3COONa和无水MgSO4,涡旋,振荡,离心,取出萃取液并冷冻4h;

此步骤②中,萃取温度70℃,预热时间5min,稳定萃取时间5min;此萃取步骤循环3次,合并三次萃取液;

③取4mL离心管二加入50mg N-丙基乙二胺,100mg C18,300mg无水MgSO4,然后加入步骤②中经冷冻的萃取液,涡旋,离心,然后取上清液,氮吹近干后,加入稳定剂,用正己烷定容,过有机滤膜,得到待测样品;

此步骤③中的无水MgSO4使用前先经以下预处理:在450℃下灼烧4h,冷却后装入磨口玻璃瓶中,置于干燥器中保存。

(2)检测

①绘制标准曲线:配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液,用GC-ECD检测,绘制标准曲线;

②将步骤(1)得到的待测样品置于进样瓶中,用GC-ECD检测,检测仪器为Agilent 

7890A型气相色谱仪,

检测器为μ-ECD,

色谱柱类型为HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm),氮气流量为1mL/min,

进样量为1μL,

进样口温度为250℃。