1.一种利用热休克法选育雌性三倍体斑马鱼的方法,包括如下步骤:以野生型AB品系斑马鱼作为亲鱼,对所述亲鱼进行人工催产、人工授精,将得到的受精卵置于培养皿中在28℃-29℃条件下静水培养2-3min,然后将受精卵转入40.5℃-41.5℃的水中热休克处理
2min,再置于28℃-29℃的水中静水孵化,待鱼苗全部孵出后,将鱼苗转入22℃-26℃的水中进行恒温培养,鱼苗孵出满3-5天后开始投喂草履虫,鱼苗孵出满15-20天后改投喂丰年虫,鱼苗孵出满2个月后,通过生物学方法进行检测筛分,获得雌性三倍体斑马鱼个体。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述亲鱼的选择标准是选择性成熟、无病无伤、体征良好以及身体健壮的野生型AB品系斑马鱼。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述人工催产的具体操作包括如下步骤:
将所述亲鱼按照雄性与雌性2:1的数量比例放入孵化盒中,暗处理10-14h,然后光照20-
30min,完成人工催产。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述人工授精的具体操作包括如下步骤:
取所述人工催产后得到的雄性斑马鱼,挤出精液用Hank’s液按体积比1:100稀释,置于冰上备用;取所述人工催产后得到的顺利产卵的雌性斑马鱼,挤出卵子,用含有精液的Hank’s液覆盖在卵子上,搅动混匀后加水,完成人工授精。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于,所述通过生物学方法进行检测筛分的具体操作包括如下步骤:鱼苗孵出满2个月后,剪取其尾鳍离散成细胞悬液,通过流式细胞仪检测,筛选出三倍体斑马鱼;然后将筛选出的三倍体斑马鱼置于28℃-29℃的水中继续培养至性成熟,根据外形特征筛选出雌性三倍体斑马鱼,并取其性腺进行组织学鉴定。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述通过流式细胞仪检测的具体操作包括如下步骤:往所述细胞悬液中加入400-500uL的DNA荧光染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚,在黑暗环境下染色8-10min,然后用孔径为30μm的筛子过滤后用流式细胞仪上机检测,根据检测结果筛选出三倍体斑马鱼。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述雌性三倍体斑马鱼的筛选标准是筛选体型肥大,腹膨大明显的三倍体斑马鱼。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述进行组织学鉴定的具体操作包括如下步骤:取筛选出的雌性三倍体斑马鱼的性腺,用波恩氏液固定,进行石蜡切片,对切片进行HE染色,用光学显微镜观察性腺结构并拍照,进行鉴定。