利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2018112566691
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种Cas9蛋白,其特征在于,所述Cas9蛋白适用于CRISPR-Cas9体系,所述Cas9蛋白的编码序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种编码如权利要求1所述的Cas9蛋白的多核苷酸。

3.一种表达载体,含有如权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种DNA基因组片段的编辑工具,为CRISPR/Cas9系统,所述CRISPR/Cas9系统包括如权利要求1所述的Cas9蛋白、或如权利要求2所述的多核苷酸、或如权利要求3所述的表达载体;所述CRISPR/Cas9系统还包含针对目标DNA片段的一个或多个sgRNA。

5.一种用于蘑菇基因编辑的CRISPR/Cas9载体,其特征在于,所述CRISPR/Cas9载体为将Cas9蛋白、U6启动子、sgRNA的核苷酸序列装载到质粒上,得到用于编辑蘑菇基因的重组载体;所述U6启动子的核苷酸序列选自SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7。

6.根据权利要求5所述的用于蘑菇基因编辑的CRISPR/Cas9载体,其特征在于,所述重组载体中还包括GFP核苷酸序列以及目标基因的左右同源臂核苷酸序列。

7.一种应用于如权利要求5或权利要求6所述的CRISPR/Cas9载体的U6启动子,其特征在于,所述U6启动子的核苷酸序列选自SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7。

8.一种蘑菇细胞株基因组片段的编辑方法,其特征在于,将如权利要求5或权利要求6所述的CRISPR/Cas9载体转染蘑菇细胞株,对蘑菇细胞株的目的基因进行编辑。

9.根据权利要求8所述的蘑菇细胞株基因组片段的编辑方法,其特征在于,所述蘑菇细胞株为CbxR抗性细胞株。

10.根据权利要求8所述的蘑菇细胞株基因组片段的编辑方法,其特征在于,所述CbxR抗性细胞株为对编码琥珀酸脱氢酶-铁硫蛋白亚基的sdhB基因序列中编码第240位组氨基酸进行了定点突变,突变后的sdhB基因序列如SEQ ID NO.2所示。

11.一种可用于基因编辑的蘑菇细胞株,其特征在于,所述蘑菇细胞株为CbxR抗性细胞株,为对编码琥珀酸脱氢酶-铁硫蛋白亚基的sdhB基因序列中编码第240位组氨基酸进行了定点突变,突变后的sdhB基因序列如SEQ ID NO.2所示。