1.一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,以假单胞菌 (Pseudomonas sp.) SK
27.016为生产菌株,以D-果糖为底物;所述方法包括以下步骤:(1)种子培养
(2)发酵培养
发酵培养基(以g/L计):氯化氨6,磷酸氢二钠5,磷酸二氢钾0.5,氯化镁0.04,硫酸钠
0.5,D-果糖12,葡萄糖6,去离子水配制;调pH 7.0;
发酵条件:接种量10%,温度35 37℃,摇床转速180 200 rpm,当发酵培养基中葡萄糖消~ ~耗结束时,补加2 g/L葡萄糖,当葡萄糖再次消耗完,停止发酵;
(3)收集菌体
(4)转化D-果糖生产D-甘露糖
用pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液悬浮菌体至OD600=2.5,然后加入80 500 g/L的D-果糖,在~温度为40℃条件下至少转化2 h。
2.根据权利要求1所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,步骤(1)种子培养采用的种子培养基:氯化氨6 g/L,磷酸氢二钠5 g/L,磷酸二氢钾0.5 g/L,氯化镁0.04 g/L,硫酸钠0.5 g/L,D-果糖12 g/L,去离子水配制,调pH 7.0。
3.根据权利要求1或2所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,种子培养条件:于平板上挑选培养良好的单菌落SK 27.016于25 37℃,摇床转速200 rpm,种子培养基中培养~
14 20 h。
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4.根据权利要求1所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,步骤(3)收集菌体,是发酵结束后,4℃、8000 rpm离心5 min,收集菌体。
5.根据权利要求1或2所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,步骤(4)还包括进一步的提取D-甘露糖的步骤,是将转化所得混合糖液离心、絮凝、脱色、板框过滤、离子交换、真空浓缩和干燥/结晶,得到纯化的D-甘露糖。
6.根据权利要求5所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,所述的离心为2000~
4000 rpm离心5 25 min;所述的絮凝为离心清液在30 80℃下,加入100 300 mg/L壳聚糖搅~ ~ ~拌絮凝;所述的脱色采用活性炭脱色;所述的板框过滤为将壳聚糖絮凝液循环压入板框过滤机滤布,直至滤液变清为止;所述的离子交换以1 3倍床体积流速上柱脱盐。
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7.根据权利要求1所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,所述假单胞菌 (Pseudomonas sp.) SK 27.016,已保藏于2014年9月12日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M 2014411,并公开在公开号CN104774794A、公开日2015年7月15日的专利中。
8.根据权利要求1或2或4或6或7所述的一种生产D-甘露糖的方法,其特征在于,步骤(4)加入100 g/L的D-果糖。