1.一种基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种重组载体,其特征在于:它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;优选地,所述重组载体是重组pGEX-6P-1。
3.一种重组菌,其特征在于:它包含权利要求2所述的重组载体;优选地,所述重组菌为Transetta(DE3)。
4.一种蛋白,其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种制备权利要求4所述蛋白的方法,其特征在于:它是采用权利要求4所述重组菌发酵制备。
6.根据权利要求5所述的的方法,其特征在于:步骤如下:(1)取权利要求3所述重组菌,活化,得菌液;
(2)将菌液接种到LB培养基中培养,3~4h后,加入IPTG诱导剂诱导培养,收集菌体;
(3)破菌,离心,取上清,纯化,即可。
7.根据权利要求6所述方法,其特征在于:步骤(1)中,所述菌液的浓度为1×106~
107cfu/ml;优选地,所述活化是采用含有Amp的LB培养基培养培养,培养时间是6-10小时,培养温度为37℃;
和/或,步骤(2)中,所述菌液的接种比例为1:50;所述培养的温度是37℃,转速为
200rpm;所述IPTG的浓度为1mol/L,加入量为培养液的1/100000;诱导培养的温度是20℃,转速为160rpm;
和/或,步骤(3)中,所述分离纯化的方法为GST标签融合蛋白纯化方法;优选地,所述纯化方法为:取上清,上树脂柱,穿流2次;采用Lysis buffer冲洗树脂去除杂蛋白;用15mmol/L还原型谷胱甘肽溶液洗脱,得蛋白;进一步优选地,所述树脂是Glutathione SepharoseTM
4B树脂;所述还原型谷胱甘肽溶液是还原型谷胱甘肽溶于Lysis buffer得到的溶液。
8.一种生产阿魏酰酪胺的转基因植物的构建方法,其特征在于:取权利要求1所述的基因片段,转入植物中,获得表达权利要求4所述蛋白的植株,即可。
9.根据权利要求8所述的构建方法,其特征在于:所述转入植物的方法是农杆菌法、基因枪法、电转法、PEG介导法、脂质体法和磷酸钙-DNA共沉淀法中的一种;所述植物为烟草。
10.权利要求1~3所述的基因片段、重组载体、重组菌在制备高产阿魏酰酪胺青稞品种的用途。