1.基于二维液相色谱同时检测生物样本中钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己的方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将生物样本进行前处理,得到待测溶液;
所述生物样本包括血浆样本、尿液样本及肌肉组织样本;
所述血浆样本进行前处理的方法:将血浆样本按体积比3 5:10加入甲醇/乙腈混合溶~液中震荡,涡旋20~40s,离心,取上清液;其中,甲醇/乙腈混合溶液中V甲醇/V乙腈=20:75~85;所述尿液样本进行前处理方法:尿液样本进行离心,过0.22μm滤膜,取上清液;所述肌肉组织样本进行前处理方法:将肌肉组织搅碎后,按1g/3 5mL加入生理盐水中浸泡,再加入乙腈,~乙腈相对加入量为8 12mL每克肌肉组织,超声20 40min,离心,取上清液;
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2)待测溶液进样2D-LC-UV系统进行检测;所述2D-LC-UV系统的色谱柱参数为:一维柱为ASTON SXI 3.5× 25mm× 5μm柱,捕集柱为ASTON SN 4.6× 10mm× 5μm柱,二维柱为ASTON BPR2 4.6× 10 mm× 5μm柱;
进样体积100 500μL;
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流速:0.8 1.2mL/min;
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流动相:
A泵:a相为乙腈/水混合溶液,V乙腈/V水=80:20;b相为采用氨水调pH至7.5的10mM磷酸二氢铵溶液;c相为采用磷酸调节pH至3.0的10mM的磷酸二氢铵溶液;d相为甲醇/水混合溶液,V甲醇/V水=80:20;
a:b:c=25:13:62;
B泵:水;
C泵:乙腈:水:采用氨水调pH至7.5的10mM磷酸二氢铵溶液,三者的体积比为56:14:30;
时间程序:
0 1min:一维柱与捕集柱断开连接,目标组分完成在线富集;
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1 1.2min:一维柱与捕集柱断开连接,目标组分进行一维色谱分离;
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1.21 2.8min:一维柱与捕集柱连接,目标组分转移至捕集柱;
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2.81 3.5min:捕集柱与二维柱连接,目标组分转移至二维柱;
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3.5 15min:捕集柱与二维柱断开连接,进行二维色谱分离;
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柱温:40℃;
所述2D-LC-UV系统的UV检测器参数为:ch1 254nm;ch2 263nm;
3)检测结果进行定量分析。