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专利号: 2018108503505
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于早期鉴定烟草耐冷性基因位点紧密连锁的引物,其特征在于:所述引物序列为引物1 :5’- GAAAGTAACTGCAGAACAAC- 3 ’;引物2 :5’-ATGTAAATACACCGCTGATC -3’。

2.一种早期鉴定烟草耐冷性基因位点紧密连锁的分子标记方法,其特征在于:以待鉴定烟草的基因组DNA为模板,利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增,根据扩增产物来判断。

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的PCR 扩增,其体系为:ddH2O 10.75μL;

10 x Buffer 1.5μL;dNTP(2.5mM) 1.2μL;引物1+引物2(20 mM) 0.225+0.225μL;Taq酶 

0.1μL;DNA模板 1μL;总体积为15μL。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的PCR扩增,其扩增程序如下:94 ℃ 2 min ;94℃ 15 S,55 ℃ 30 S,68 ℃ 1 min,35个循环;68℃ 5min。

5.如权利要求2至4任一项所述的方法,其特征在于,采用耐冷型烟草“NC567”作为对照。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,其是用原生质体DNA印迹法提取待鉴定烟草的基因组DNA。

7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:将扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,确定待鉴定烟草的耐冷性:如果待鉴定烟草的PCR扩增产物电泳条带有与NC567带型相同的条带,则待鉴定烟草是具有较好的耐冷性的烟草,如果待鉴定烟草的PCR扩增产物电泳条带没有与NC567带型相同的条带,则待鉴定烟草为非耐冷性烟草。

8.利用如权利要求1所述的引物,或权利要求2至7任一项所述的方法在耐冷性烟草育种中的应用。