1.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感器,其特征是,包括适体DNA、分子信标;
所述适体DNA的中部含有能够对PDGF-BB进行特异性识别的适体序列,当适体DNA未与PDGF-BB结合时,适体DNA呈现的构象含有至少3个小茎-环结构,当适体DNA与PDGF-BB结合时,适体DNA呈现的构象含有一个大茎-环结构,且大茎-环结构的环结构含有至少2个小茎-环结构,且大茎-环结构的5′端和3′端均具有未杂交的自由序列;
所述分子信标的DNA序列能够与大茎-环结构的5′端和3′端的自由序列互补,且互补后分子信标的5′端长于大茎-环结构的3′端。
2.如权利要求1所述的传感器,其特征是,所述DNA序列由5′端至3′端的序列为:TGCACCTCAGCAGCAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTGCATCCGAGCAGGAACGA。
3.如权利要求1所述的传感器,其特征是,所述分子信标由5′端至3′端的序列为:CGACTCGTTCCTGCTCGGATCTGAGGTGCAGTGAAAACGAGTCG。
4.一种与权利要求1~3任一所述的传感器配合的引物DNA,其特征是,所述引物DNA能够引发脱氧核糖核苷酸以分子信标的DNA序列为模板进行聚合,且引物DNA中含有DNA剪切酶的识别位点。
5.如权利要求4所述的引物DNA,其特征是,引物的序列为:CGACTCGT。
6.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感系统,其特征是,包括权利要求1~3任一所述的传感器、权利要求4或5所述的引物DNA。
7.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的方法,其特征是,将含有PDGF-BB的待测物与上述传感器混合,PDGF-BB与适体DNA结合后,适体DNA产生构象变化,使其在5′端和3′端裸露出能够与分子信标1的DNA序列互补的自由序列,并与分子信标1的DNA序列杂交,然后上述引物DNA与分子信标1的5′端的序列结合,在DNA聚合酶的作用下,以分子信标1为模板生成DNA序列并替换适体DNA,从而形成双链DNA,被替换的适体DNA与分子信标2的DNA序列杂交,然后在引物DNA和DNA聚合酶的作用下循环产生大量双链DNA,双链DNA在DNA剪切酶以及DNA聚合酶的作用下再次以分子信标为模板形成双链DNA并替换出分子信标1的互补链,产生的互补链与分子信标3杂交,从而放大荧光信号。
8.如权利要求7所述的方法,其特征是,步骤为:将适体DNA加入至含有PDGF-BB的待测物中预反应一段时间,然后加入KF缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、DNA剪切酶、NEB 2缓冲液、分子信标、引物DNA培育一段时间后进行荧光检测;
优选的,预反应的时间为15~20min;
优选的,培育的时间为1±0.1h;
优选的,培育后进行终止聚合反应后进行荧光检测。
9.一种荧光检测PDGF-BB的试剂盒,其特征是,包括权利要求1~3任一所述的传感器、权利要求4或5所述的引物DNA、DNA聚合酶、DNA剪切酶、dNTPs。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征是,包括KF缓冲液、dNTPs、NEB 2缓冲液。