1.一种调节血小板聚集的组合物,其特征在于,该组合物包含以下组分:
香叶醇geraniol、杯苋甾酮cyasterone、葛花苷kakkalide、萱草根素hemerocallin和刺芒柄花素formononetin。
2.根据权利要求1所述的调节血小板聚集的组合物,其特征在于,该组合物中:
香叶醇geraniol 2‑4重量份、杯苋甾酮cyasterone 0.7‑1.9重量份、葛花苷kakkalide
1.1‑3.1重量份、萱草根素hemerocallin 0.7‑1.3重量份和刺芒柄花素formononetin 0.8‑
1.6重量份。
3.以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,包含以下步骤:
1)血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白三维结构的获取;
2)采用分子对接软件,以舒尼替尼Sunitinib为中心确定血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白结构的活性位点区域;
3)对柴胡、川牛膝、葛花、萱草根和葛根五种中药材的小分子配体与血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白进行计算机虚拟筛选,根据设定的活性位点区域,利用分子对接软件,将每个小分子配体与血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)活性位点区域分别进行分子对接,记录对接得分数据;
4)根据步骤3)的对接得分结果进行排序,确定可调节血小板聚集的组合物:香叶醇geraniol、杯苋甾酮cyasterone、葛花苷kakkalide、萱草根素hemerocallin和刺芒柄花素formononetin。
4.根据权利要求3所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,在血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白三维结构的获取之前,从数据库搜寻中药柴胡、川牛膝、葛花、萱草根和葛根五种中药材的有效化学成分,共得到264个化学成分信息,其中柴胡83个,川牛膝36个,葛花104个,萱草根24个,葛根17个,对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进行前处理优化。
5. 根据权利要求4所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进‑1 ‑1行前处理优化,能量阈值设定为0.5 kJ×nm ×mol 。
6. 根据权利要求3所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,步骤1)中血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白三维结构的获取具体是通过以下方式:通过RCSB PDB蛋白数据库获取,其PDB ID为5GRN,该蛋白共有
356个氨基酸残基,其构建方式为X射线衍射,分辨率为: 1.77 Å。
7.根据权利要求3所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,步骤2)所述的以舒尼替尼Sunitinib为中心确定血小板衍生生长因子受体α蛋白(PDGFRA)结构的活性位点区域的具体方法是:血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白和舒尼替尼Sunitinib分别加入到分子对接Maestro系统中,进行加氢原子、删除水分子、处理重原子前处理,采用glide对接模块下活性口袋生成面板,以舒尼替尼Sunitinib为中心确定血小板衍生生长因子受体α蛋白(PDGFRA)结构的活性位点区域。
8.根据权利要求3所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)从数据库搜寻中药柴胡、川牛膝、葛花、萱草根和葛根五种中药材的有效化学成分,共得到264个化学成分信息,其中柴胡83个,川牛膝36个,葛花104个,萱草根24个,葛根17个,对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进行前处理优化;
(2)通过RCSB PDB蛋白数据库获取血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白结构,其PDB ID为5GRN,该蛋白共有356个氨基酸残基,其构建方式为X射线衍射,分辨率为: 1.77 Å;
(3)将步骤(2)得到的血小板衍生生长因子受体α蛋白和舒尼替尼Sunitinib分别加入到分子对接Maestro系统中,进行加氢原子、删除水分子、处理重原子前处理,采用glide对接模块下活性口袋生成面板,以舒尼替尼Sunitinib为中心确定血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白结构的活性位点区域;将步骤(1)得到的5味中药的264个化合物分子导入分子对接Maestro系统中,血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白和化合物分子间距离设定为1.0/0.8;即:将柴胡、川牛膝、葛花、萱草根和葛根五种中药材的264个化合物分子分别引入到血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白结构的活性位点区域,与血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)蛋白进行虚拟筛选工作,每个化合物与血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)活性位点区域进行分子对接,记录对接得分数据;根据对接得分进行排序,确定可调节血小板聚集的组合物:香叶醇geraniol、杯苋甾酮cyasterone、葛花苷kakkalide、萱草根素hemerocallin和刺芒柄花素formononetin;
(4)通过实体药理实验进行生物活性验证。
9.根据权利要求8所述的以血小板衍生生长因子受体α为靶点筛选调节血小板聚集的组合物的方法,其特征在于,药理实验步骤为:(1)取体重18‑22g的ICR小鼠,分别给予相对应的药物,尾静脉注射给药,连续给药7天,末次给药结束后1.5‑2.5小时内摘取小鼠眼球取血,肝素钠抗凝,离心取上清液得到含药血浆;
(2)选用小鼠PDGFRA酶联免疫分析试剂盒,应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血小板衍生生长因子受体(PDGFRA)水平,用酶标仪测定吸光度,通过标准曲线计算小鼠的含药血浆中血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)浓度;
(3)将每个测得值与空白对照组的差值除以空白对照组的测得值,即得血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)抑制率,以评价五个化合物组合抑制血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)药效特征。
10.权利要求1或2所述的调节血小板聚集的组合物在制备抗血小板聚集或调节血小板聚集的药物中的应用。