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专利号: 2018102691430
申请人: 曲阜师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种吖啶酮类稳定同位素巯基化合物标记试剂,其特征在于:以吖啶酮为母体环,马来酰亚胺为反应基团与同位素标记基团,其化学名称为:N-(4-(吖啶酮-10-基)-苯基)-N-[d0]/[d2]马来酰亚胺,其化学结构式为:其中:当X=H时,为N-(4-(吖啶酮-10-基)-)苯基)-N-[d0]马来酰亚胺;当X=D时,为N-(4-(吖啶酮-10-基)-)苯基)-N-[d2]马来酰亚胺。

2.一种如权利要求1所述吖啶酮类稳定同位素巯基化合物标记试剂的合成方法,其特征在于,将吖啶酮与4-溴乙酰苯胺进行取代反应,得到中间体Ⅰ10-((4-乙酰氨基)-苯基)-吖啶酮,然后中间体Ⅰ在碱性条件下加热水解,得到中间体Ⅱ10-((4-氨基)-苯基)-吖啶酮;

将中间体Ⅱ与[d0]/[d2]马来酸酐进行酰化缩合反应,生成目标产物N-(4-(吖啶酮-10-基)-苯基)-N-[d0]/[d2]马来酰亚胺。

3.根据权利要求2所述的合成方法,其特征在于,该合成方法具体包括以下步骤:

1)取代反应:将吖啶酮和4-溴乙酰苯胺溶解到二甲亚砜中,并与碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾混合,油浴130℃反应12h,反应结束待反应液冷却至室温后抽滤,得抽滤液,然后将抽滤液与(10-30)wt%的NaCl水溶液混合析出沉淀,回收沉淀固体并干燥,得到中间体Ⅰ10-((4-乙酰氨基)-苯基)-吖啶酮;

2)水解反应:将中间体Ⅰ溶解于溶有氢氧化钾水溶液的二甲亚砜溶液中,于100℃反应2小时,冷却后,将反应液与(10-30)wt%的NaCl水溶液混合,回收固体并干燥,用N,N-二甲基甲酰胺和乙腈按照体积比v:v=5:1重结晶制得中间体Ⅱ10-((4-氨基)-苯基)-吖啶酮;

3)酰化反应:将[d0]/[d2]马来酸酐溶解到N,N-二甲基甲酰胺中,滴加溶有中间体Ⅱ的N,N-二甲基甲酰胺溶液,于25℃反应1小时,反应结束后将反应液倒入冰水中,回收固体并干燥;固体干燥后加入乙酸酐溶解,再加入无水乙酸钠,于85℃下反应1小时,待反应液冷却到室温后慢慢倒入冰水中,回收固体并干燥,用N,N-二甲基甲酰胺重结晶得目标产物N-(4-(吖啶酮-10-基)-苯基)-N-[d0]/[d2]马来酰亚胺。

4.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于,在步骤1)的所述取代反应中,吖啶酮与4-溴乙酰苯胺摩尔比为1:1.5,碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾的加入量分别为吖啶酮质量的25%、22%和50%。

5.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于,在步骤2)的所述水解反应中,氢氧化钾的加入量为10-((4-氨基)-苯基)-吖啶酮质量的30%。

6.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于,在步骤3)的所述酰化反应中,10-((4-氨基)-苯基)-吖啶酮与[d0]/[d2]马来酸酐的摩尔比为1:1.1,乙酸钠的加入量为10-((4-氨基)-苯基)-吖啶酮质量的10%。

7.一种吖啶酮类稳定同位素巯基化合物标记试剂的应用,其特征在于:该标记试剂结构如权利要求1所述,或者通过如权利要求2-6中任一项所述合成方法合成;

其中,该标记试剂用于检测样品中巯基化合物的浓度。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:

a.配制醋酸铵-氢氧化钠缓冲溶液和硫醇标准品乙腈溶液;配制浓度为1×10-4mol/L的N-(4-(吖啶酮-10-基)-苯基)-N-[d0]马来酰亚胺的乙腈溶液作为轻型标记试剂溶液;配制-4浓度为1×10 mol/L的N-(4-(吖啶酮-10-基)-苯基)-N-[d2]马来酰亚胺的乙腈溶液作为重型标记试剂溶液;

b.依次将体积比1:2:1的醋酸铵-氢氧化钠缓冲溶液、硫醇标准品溶液和轻型标记试剂溶液混合,于40℃的水浴中反应10min;依次将体积比1:2:1的醋酸铵-氢氧化钠缓冲溶液、经柱纯化或膜过滤后的样品和重型标记试剂溶液混合,于40℃的水浴中反应10min;反应完成后,将上述两个反应液按体积比为1:1进行混合,进样进行高效液相色谱-质谱串联技术分析;

c.轻型标记试剂衍生后所得轻型衍生物的峰面积表示为A1,硫醇的浓度表示为C1;重型标记试剂衍生后所得重型衍生物的峰面积记为A2,样品中硫醇的浓度表示为C2,则根据公式C1/C2=A1/A2,即可求得样品中硫醇的浓度。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,在步骤a中,醋酸铵-氢氧化钠缓冲溶液的pH=7.4、浓度为0.01mol/L,硫醇标准品乙腈溶液的浓度为1×10-6mol/L。

10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,在步骤b中,硫醇标准品溶液为100μL,经柱纯化或膜过滤后的样品为100μL。