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专利号: 2022103491283
申请人: 曲阜师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于喹啉酮母体的同位素编码标记试剂的应用,其特征在于,所述基于喹啉酮母体的同位素编码标记试剂包括轻型标记试剂和重型标记试剂,其中轻型标记试剂的化学结构式如式1所示,命名为[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸;重型标记试剂的化学结构式如式2所示,命名为[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸;

式1;

式2;

其中,所述D即H元素的同位素氘;

其中,所述标记试剂用于检测样品中胺类化合物或酚类化合物的浓度。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述胺类化合物为尸胺、腐胺、乙胺、丙胺、丁胺、N‑甲基乙胺、N‑甲基丙胺或N‑甲基丁胺;所述酚类化合物为尼泊金酯、对氯苯酚、对溴苯酚或苯酚。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述尼泊金酯为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯或尼泊金丁酯。

4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述胺类化合物为尸胺时,采用以下步骤进行检测:‑4

(1)在10 mL容量瓶中配制浓度为10  mol/L的尸胺标准溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

(2)在10 mL容量瓶中配制浓度为0.1 mol/L的1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

(3)在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

(4)在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

(5)在第一安瓿瓶中加入100 μL所述尸胺标准溶液,100 μL所述[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,100 μL1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,在50℃的水浴加热条件下进行缩合反应40 min,即得反应液A,备用;

(6)在第二安瓿瓶中加入100 μL所述尸胺标准溶液,100 μL所述[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,100 μL1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,在50℃的水浴加热条件下进行缩合反应40 min,即得反应液B,备用;

(7)将所述反应液A、反应液B按体积比1:1混合后,进行HPLC‑MS/MS串联质谱分析。

5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述胺类化合物为腐胺时,采用以下步骤进行检测:‑4

(1)在10 mL容量瓶中配制浓度为10  mol/L的腐胺标准溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

(2)在10 mL容量瓶中配制浓度为0.1 mol/L的1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

(3)在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

(4)在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

(5)在第一安瓿瓶中加入100 μL所述腐胺标准溶液,100 μL所述[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,100 μL1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,在50℃的水浴加热条件下进行缩合反应40 min,即得反应液C,备用;

(6)在第二安瓿瓶中加入100 μL所述腐胺标准溶液,100 μL所述[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,

4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸溶液,100 μL1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液,在50℃的水浴加热条件下进行缩合反应40 min,即得反应液D,备用;

(7)将所述反应液C、反应液D按体积比1:1混合后,进行HPLC‑MS/MS串联质谱分析。

6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述酚类化合物为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯或尼泊金丁酯时,采用以下步骤进行检测:(1)同位素编码酰氯试剂的制备:

步骤一、在50 mL圆底烧瓶中加入0.0022 g所述[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,4‑二氢‑代喹啉‑

2‑羧酸,加入5 mL氯化亚砜,在70℃下回流50 min,将反应液用旋转蒸发仪在70℃下悬干,得轻型同位素编码酰氯试剂[d0]‑1‑甲基‑4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯,备用;

步骤二、在50 mL圆底烧瓶中加入0.0022 g所述[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,4‑二氢‑代喹啉‑

2‑羧酸,加入5 mL氯化亚砜,在70℃下回流50 min,将反应液用旋转蒸发仪在70℃下悬干,得重型同位素编码酰氯试剂[d3]‑1‑甲基‑4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯,备用;

(2)上述酰氯试剂用于尼泊金酯定性和相对定量分析,采用以下步骤:‑4

步骤一、在四个10 mL容量瓶中分别配制浓度为10  mol/L的尼泊金甲酯标准溶液、尼泊金乙酯标准溶液、尼泊金丙酯标准溶液、尼泊金丁酯标准溶液,均置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

步骤二、用100 mL容量瓶配制浓度为0.1 mol/L的NaHCO3/Na2CO3缓冲溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

步骤三、在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d0]‑1‑甲基‑4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

步骤四、在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的[d3]‑1‑甲基‑4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

步骤五、准备四个安瓿瓶,分别加入100 μL所述尼泊金甲酯标准溶液、尼泊金乙酯标准溶液、尼泊金丙酯标准溶液、尼泊金丁酯标准溶液,加入100 μL所述[d0]‑1‑甲基‑4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯溶液,200 μL pH=9的所述缓冲溶液,在70℃的水浴条件下加热反应30 min,即得反应液E;

步骤六、同时,在另外四个安瓿瓶中分别加入100 μL所述尼泊金甲酯标准溶液、尼泊金乙酯标准溶液、尼泊金丙酯标准溶液、尼泊金丁酯标准溶液,加入100 μL所述[d3]‑1‑甲基‑

4‑喹啉酮‑2‑甲酰氯溶液,200 μL pH=9的所述缓冲溶液,在70℃的水浴条件下加热反应30 min,即得反应液F;

步骤七、将所述反应液E、反应液F按体积比1:1混合后,进行HPLC‑MS/MS串联质谱分析。

7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述胺类化合物为乙胺、丙胺、丁胺、N‑甲基乙胺、N‑甲基丙胺或N‑甲基丁胺,或所述酚类化合物为对氯苯酚、对溴苯酚或苯酚时,采用以下步骤进行检测:(1)活性酯的制备:

步骤一、称取所述[d0]1‑甲基‑4‑氧‑1 ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸0.5 g、羰基二咪唑0.25 g,置于250 mL的圆底烧瓶中,加入220 mL乙腈和5mL DMF,使原料充分溶解;然后在80℃水浴加热反应20 min;完成将温度降至50℃,向反应体系中加入0.325g N‑羟基琥珀酰亚胺,密封后反应60 min;反应完成后,冷却至室温,静置,取上清液减压蒸馏得到浅黄色固体,用水清洗三次以上,放入烘箱中调节温度为干燥,得轻型活性酯;

步骤二、称取所述[d3 ]1‑甲基‑4‑氧‑1  ,4‑二氢‑代喹啉‑2‑羧酸 0.5 g、羰基二咪唑

0.25 g,置于250 mL的圆底烧瓶中,加入220 mL乙腈和5 mL DMF,使原料充分溶解;然后在

80℃水浴加热反应20 min;完成将温度降至50℃,向反应体系中加入0.325 g N‑羟基琥珀酰亚胺,密封后反应60 min;反应完成后,冷却至室温,静置,取上清液减压蒸馏得到浅黄色固体,用水清洗三次以上,放入烘箱中调节温度为干燥,得重型活性酯;

(2)将上述轻型活性酯、重型活性酯试剂用于所述胺类化合物或酚类化合物的定性和相对定量分析,包含以下步骤:‑4 

步骤一、在九个10 mL容量瓶中分别配制浓度为10 mol/L的乙胺标准样品溶液、丙胺标准样品溶液、丁胺标准样品溶液、N‑甲基乙胺标准样品溶液、N‑甲基丙胺标准样品溶液、N‑甲基丁胺标准样品溶液、对氯苯酚标准样品溶液、对溴苯酚标准样品溶液、苯酚标准样品溶液,均置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

步骤二、用100 mL容量瓶配制浓度为0.1 mol/L的NaHCO3/Na2CO3缓冲溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

步骤三、在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的所述轻型活性酯溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

‑4

步骤四、在10 mL容量瓶中用乙腈为溶剂配制浓度为7×10  mol/L的所述重型活性酯溶液,置于4℃冰箱中冷藏储存备用;

步骤五、准备九个安瓿瓶,分别加入100 μL所述乙胺标准样品溶液、丙胺标准样品溶液、丁胺标准样品溶液、N‑甲基乙胺标准样品溶液、N‑甲基丙胺标准样品溶液、N‑甲基丁胺标准样品溶液、对氯苯酚标准样品溶液、对溴苯酚标准样品溶液、苯酚标准样品溶液,加入

100 μL所述轻型活性酯溶液、200 μL pH=9的所述缓冲溶液,在70℃的水浴条件下加热反应30 min,即得轻型衍生物的反应液G;

步骤六、准备九个安瓿瓶,分别加入100 μL所述乙胺标准样品溶液、丙胺标准样品溶液、丁胺标准样品溶液、N‑甲基乙胺标准样品溶液、N‑甲基丙胺标准样品溶液、N‑甲基丁胺标准样品溶液、对氯苯酚标准样品溶液、对溴苯酚标准样品溶液、苯酚标准样品溶液,加入

100 μL所述重型活性酯溶液、200 μL pH=9的所述缓冲溶液,在70℃的水浴条件下加热反应30 min,即得含有重型衍生物的反应液H;

步骤七、将所述反应液G、反应液H按体积比1:1混合后,进行HPLC‑MS/MS串联质谱分析。