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专利号: 2017114874669
申请人: 江苏大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-09-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一组用于鉴定鳖甲的特异性引物,所述引物为 PPS-1 或 PPS-2,具体如下所示:PPS-1 上下游引物如 SEQ.ID.NO.1 和 2 所示,分别为:PPS-1-F:AGCCCTATCAGTTTGAATACCACPPS-1-R:CAACCGGACCATATAATTGAGTPPS-2 上下游引物如 SEQ.ID.NO.3 和 4 所示,分别为:PPS-2-F: ATATGACTACTAGCCGCACTPPS-2-R: GGCAGCTAAGATTATTGACCC。

2.如权利要求 1 所述的特异性引物,其特征在于,所述引物还包括引物对 PAF-2,具体如下所示:PAF-2 上下游引物如 SEQ.ID.NO.7 和 8 所示,分别为:PAF-2-F:CCTATCACTACACCCCATACAACPAF-2-R:ATGCTACTAATAATGACACCCC 。

3. 权利要求2 所述的引物在鉴定鳖甲产品真伪或掺伪中的应用。

4. 根据权利要求 3 所述的应用,其特征在于,所述的引物在鉴定鳖甲产品中是否混有佛罗里达鳖甲中的应用。

5.根据权利要求 3 或 4 所述的应用,其特征在于,所述的鳖甲产品是指鳖甲基原、药材或饮片。

6.一种特异性鉴定鳖甲的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求 1 所述的 PPS-1 或PPS-2 引物对、DNA 阳性对照、PCR 反应体系和电泳检测体系。

7.根据权利要求 6 所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括权利要求 2 所述的 PAF-2引物对。

8.一种特异性鉴定鳖甲的方法,其特征在于,采用权利要求 6 或 7 所述的试剂盒按照下述步骤进行:(1)提取纯化鳖甲样品 DNA 制得 DNA 供试品溶液,测定其纯度及浓度,备用;

(2)使用权利要求 6 或 7 所述的试剂盒进行PCR反应;

(3)扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离,根据电泳条带的有无及分子量大小判定鳖甲的真伪或掺伪情况。

9.根据权利要求 8 所述的一种特异性鉴定鳖甲的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的 PCR反应的反应体系包括:1×PCR 缓冲液,2.0 mM MgCl2,0.2 mM dNTPs,0.1 μM~0.4 μM引物对,0.625 U Taq DNA 聚合酶,模板 DNA 1 ng 300 ng,加灭菌双蒸水补足至 25 μL。

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10.根据权利要求8 所述的一组特异性引物及其鉴定鳖甲的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的 PCR反应的扩增程序为:95℃ 3 min;95℃ 30 s,58℃ 68℃ 30 s,72℃ 1 ~min,循环数 30 40;72℃ 5 min 7 min。

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