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专利号: 2021101197746
申请人: 成都大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记,其特征在于,为核苷酸序列如SEQ.ID.NO1所示的DNA分子。

2.一种用于扩增权利要求1所述分子标记的鉴定波棱瓜性别的引物组,其特征在于,所述引物组包括核苷酸序列如SEQ.ID.NO2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ.ID.NO3所示的反向引物。

3.一种用于波棱瓜性别鉴定的试剂盒,其特征在于,包括权利要求2所述的引物组。

4.一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记的鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)取被测波棱瓜,提取波棱瓜叶片基因组DNA;

2)以波棱瓜叶片基因组DNA为模板,用核苷酸序列如SEQ.ID.NO2和SEQ.ID.NO3所示的引物组进行RAPD‑SCAR‑PCR扩增反应,得到扩增产物;

3)对扩增产物进行凝胶电泳检测;

4)观察电泳结果,如果存在423bp的目标条带,则被测波棱瓜为雌性植株;如果不存在

423bp的目标条带,则被测波棱瓜为雄性植株。

5.根据权利要求书4所述的一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记的鉴定方法,其特征在于,RAPD‑SCAR‑PCR扩增反应的反应体系每20μL包括:10×buffer 2μL,浓度为

10μmol/L的正向引物0.75μl,浓度为10μmol/L的反向引物0.75μl,浓度为1.25~20ng/μl的模板DNA2μl,浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶4μl,浓度为2.5mmol/L的dNTPs 1.6μl,ddH2O余量。

6.根据权利要求书4所述的一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记的鉴定方法,其特征在于,RAPD‑SCAR‑PCR扩增程序为:预变性95℃3min;然后重复35次下述循环:95℃变性30s,35℃复性30s,72℃延伸1min;最后72℃延伸5min,得到扩增产物。

7.根据权利要求书4所述的一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记的鉴定方法,其特征在于,被测波棱瓜叶片选自新鲜、无虫斑和病斑的波棱瓜幼嫩叶片。

8.根据权利要求书4所述的一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记的鉴定方法,其特征在于,步骤3)包括以下步骤:将步骤2)得到的扩增产物用8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,溴化乙锭染色后经凝胶成像分析仪观察。

9.用于波棱瓜性别鉴定的如权利要求1所述的特异性SCAR分子标记或如权利要求2所述的引物组或如权利要求3所述的试剂盒或如权利要求4‑8任一项所述鉴定方法在波棱瓜性别鉴定或育种中的应用。