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专利号: 2017114872451
申请人: 江苏大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-09-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一组鉴定僵蚕的特异性引物,所述引物为PBM-1或PBM-2和PBB-1或PBB-2;PBM-1上下游引物如SEQ.ID.NO.1和2所示,BM-2上下游引物如SEQ.ID.NO.3和4所示;PBB-1上下游引物如SEQ.ID.NO.5和6所示,PBB-2上下游引物如SEQ.ID.NO.7和8所示。

2.根据权利要求1所述的鉴定僵蚕的特异性引物,所述引物还包括引物PMA-1或PMA-2;

PMA-1上下游引物如SEQ.ID.NO.9和10所示;PMA-2上下游引物如SEQ.ID.NO.11和12所示。

3.权利要求1或2所述的引物在鉴定僵蚕真伪或掺伪中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述应用为首先鉴定僵蚕是否来源于家蚕和白僵菌,其次权利要求1所述引物结合权利要求2所述引物鉴定其中是否掺杂绿僵菌。

5.一种特异性鉴定僵蚕的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对、DNA阳性对照、PCR反应体系、电泳鉴定体系。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括权利要求2所述的引物对。

7.一种特异性鉴定僵蚕的方法,其特征在于,采用权利要求5或6中所述的试剂盒进行,按照下述步骤进行:(1)采用CTAB法提取僵蚕样品的DNA;

(2)将僵蚕样品的DNA模板与特异性引物进行PCR扩增;

(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析和凝胶成像系统检测条带。

8.根据权利要求7所述的一种特异性鉴定僵蚕的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的PCR扩增,其反应体系1×PCR缓冲液、2.0mmol/L MgCl2、0.2mmol/L dNTPs、0.1μmol/L~0.4μmol/L引物对、0.625U Taq DNA聚合酶、模板DNA 1ng~600ng,以灭菌dd H2O补足至25μL。

9.根据权利要求7所述的一种特异性鉴定僵蚕的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的PCR扩增程序为:95℃预变性3min;95℃变性30s,56℃~65℃退火30s,72℃延伸1min,循环数30~40;72℃延伸7min。